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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】关于引物非特异性的问题
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nininini

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】关于引物非特异性的问题

我的引物25bp左右，目的产物100左右，以基因组为模板时扩增特异性很好，没发现非特异性，但后来以cDNA为模板却出现了50多的位置有一个明显的条带，目的条带也是有的，我的对照组没有加模板，只有引物，条带却是在100bp左右，那我的50bp左右的条带会是什么呢，请高手帮忙解释一下
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1楼 2011-04-06 18:50:53
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
nininini(金币+1):谢谢参与
看看融解曲线的情况吧。最好把图放上来哦。
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2楼2011-04-06 19:13:01
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nininini

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-06 19:13:01:
看看融解曲线的情况吧。最好把图放上来哦。

是先用普通PCR 验证引物 P的，还没做real-time呢
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3楼2011-04-06 19:17:00
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
★
nininini(金币+1):谢谢参与
你是要做什么啊，如果是普通的P就不用基因组为模板啊，说的很模糊啊~~
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4楼2011-04-06 20:01:03
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
nininini(金币+1):谢谢参与
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-04-06 22:36:45
楼主看是不是有这种可能：楼主设计的引物时跨了内含子，以基因组DNA为模版扩增时扩出来的100bp包含了内含子，而提取的RNA含有未除干净的DNA,反转录成cDNA时，扩增的条带中包含了两种条带，即以DNA为模版的扩增和以cDNA为模板的扩增。
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5楼2011-04-06 21:59:23
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65900931

银虫 (小有名气)
★
nininini(金币+1):谢谢参与
最好看看电泳图。
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6楼2011-04-06 22:50:50
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nininini

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-04-06 21:59:23:
楼主看是不是有这种可能：楼主设计的引物时跨了内含子，以基因组DNA为模版扩增时扩出来的100bp包含了内含子，而提取的RNA含有未除干净的DNA,反转录成cDNA时，扩增的条带中包含了两种条带，即以DNA为模版的扩增和以 ...

我的是细菌的RNA，不存在内含子的问题~~还有什么解释方法吗~~谢谢啦~
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7楼2011-04-07 10:39:35
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