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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot 缺带 断带
汕头大学海洋科学接受调剂
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ybh1987213

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】western blot 缺带 断带

最近做Western blot 出现了比较诡异的问题，一个流程下来，胶片的曝光结果上有个别条带断开，或者干脆就缺失，包括泳道背景也丢失了，就好像膜上有个大气泡一样。但是膜用立春红染后相当完整，我抗体孵育的时候杂交袋中的抗体工作液也相当充盈，肯定没有气泡，不知是什么原因导致的。
初步怀疑可能在底物显色的时候用玻璃棒赶发光也所致，不知道有没有道理，各位有没有什么好办法可以避免这样的悲剧。
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1楼 2011-04-02 14:58:46
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ybh1987213

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 要加油啊，欢迎继续交流 2011-04-08 08:48:51
引用回帖:
Originally posted by dreaming0816 at 2011-04-03 17:10:50:
如果是曝光的问题，可以改作DAB显色，凝胶成像系统拍照分析啊。

不瞒你说，我还真做过整版只点一个样品的测试，结果有的时候确实重复性很好，有的时候重复性巨差，立春红染色后观察目的条带几乎都很均一，是在肉眼很难分辨，我对WB的实验重复性彻底失去信心了
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8楼2011-04-07 10:20:37
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dreaming0816

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-04 08:33:28
如果是曝光的问题，可以改作DAB显色，凝胶成像系统拍照分析啊。
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2楼2011-04-03 17:10:50
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funking

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-04 08:33:39
转膜和孵抗体确定都没问题的话，基本上就是最后显色液的问题了   做个重复就清楚了
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3楼2011-04-03 22:56:14
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-06 18:33:30
可能会是转膜的时候在滤纸，什么的上面有残留气泡影响了蛋白质的转膜过程即残留有气泡的地方可能就没发生蛋白质转移
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4楼2011-04-05 17:38:21
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