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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot 缺带 断带
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ybh1987213

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】western blot 缺带 断带

最近做Western blot 出现了比较诡异的问题，一个流程下来，胶片的曝光结果上有个别条带断开，或者干脆就缺失，包括泳道背景也丢失了，就好像膜上有个大气泡一样。但是膜用立春红染后相当完整，我抗体孵育的时候杂交袋中的抗体工作液也相当充盈，肯定没有气泡，不知是什么原因导致的。
初步怀疑可能在底物显色的时候用玻璃棒赶发光也所致，不知道有没有道理，各位有没有什么好办法可以避免这样的悲剧。
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1楼 2011-04-02 14:58:46
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ybh1987213

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励新虫交流。显然您是高手^_^ 2011-04-10 19:21:33
引用回帖:
Originally posted by gyq625 at 2011-04-06 10:28:40:
您好，我是研一学生，也开始学做分子生物学这块，但我们研究室刚做这块，技术基础和条件什么都没有，只能摸索啊。那个western 所用的燃料一般选用什么较好哇，是SYBR GREEN还是考马斯亮蓝或者别的？一般做western ...

染胶就用考马斯亮蓝，染膜就用立春红，试剂什么的配方网上就有很多，大体都差不多，WB最关键的一点就是抗体抗体，抗体好闭眼睛都能做出来，如果新手的话建议你先拿内参抗体练手。差不多了再用实验样本，毕竟样本不好弄啊。
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10楼2011-04-07 10:27:43
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查看全部 22 个回答

dreaming0816

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-04 08:33:28
如果是曝光的问题，可以改作DAB显色，凝胶成像系统拍照分析啊。
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2楼2011-04-03 17:10:50
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funking

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-04-04 08:33:39
转膜和孵抗体确定都没问题的话，基本上就是最后显色液的问题了   做个重复就清楚了
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3楼2011-04-03 22:56:14
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-06 18:33:30
可能会是转膜的时候在滤纸，什么的上面有残留气泡影响了蛋白质的转膜过程即残留有气泡的地方可能就没发生蛋白质转移
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4楼2011-04-05 17:38:21
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