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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家帮忙看一张电泳图
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大家帮忙看一张电泳图

这是张单酶切的电泳图。我原来的质粒大小是5700bp左右，预计插入一个817bp的片段。连接转化后挑了六个单菌落，其中有三个菌液PCR有预期结果。然后我就提质粒单酶切。结果竟然都有两三个条带，不知道问题出在哪？而且从条带位置上看，中间一个条带的位置是我预期的6500多bp。求大家帮忙分析下。
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1楼 2011-03-28 10:44:04
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另一个天堂

金虫 (小有名气)
liuwei78(金币+3): 2011-03-29 09:09:18
是不是酶切时间过短了，你可以参考一下
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4楼2011-03-28 15:23:52
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
liuwei78(金币+3): 2011-03-29 09:11:34
能把Maker大小说一下吗？
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2楼2011-03-28 13:12:12
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wzwhq

铁虫 (小有名气)
liuwei78(金币+3): 2011-03-29 09:11:41
可能是你酶切时间短，切不完全导致的吧，6500是你的目的片段，下面的是没有切开的质粒，跑得比较快，个人看法，仅供参考。
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3楼2011-03-28 15:20:03
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): good 2011-03-29 08:42:57
liuwei78(金币+3): 2011-03-29 09:09:07
单酶切验证，你确定你的质粒和插入片段上只有一个此酶切位点吗？我看有三个，不然怎么会切出来三条带呢？
一般做酶切验证是这样子的，把重组质粒用你当初的两个酶进行酶切，然后跑电泳时点上对照（原来酶切的质粒+原来酶切的基因）。
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5楼2011-03-28 15:37:43
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