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liuwei78

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】大家帮忙看一张电泳图

这是张单酶切的电泳图。我原来的质粒大小是5700bp左右,预计插入一个817bp的片段。连接转化后挑了六个单菌落,其中有三个菌液PCR有预期结果。然后我就提质粒单酶切。结果竟然都有两三个条带,不知道问题出在哪?而且从条带位置上看,中间一个条带的位置是我预期的6500多bp。求大家帮忙分析下。
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dhd997(金币+5): good 2011-03-29 08:42:57
liuwei78(金币+3): 2011-03-29 09:09:07
单酶切验证,你确定你的质粒和插入片段上只有一个此酶切位点吗?我看有三个,不然怎么会切出来三条带呢?
一般做酶切验证是这样子的,把重组质粒用你当初的两个酶进行酶切,然后跑电泳时点上对照(原来酶切的质粒+原来酶切的基因)。
5楼2011-03-28 15:37:43
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)


liuwei78(金币+3): 2011-03-29 09:11:34
能把Maker大小说一下吗?
2楼2011-03-28 13:12:12
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wzwhq

铁虫 (小有名气)


liuwei78(金币+3): 2011-03-29 09:11:41
可能是你酶切时间短,切不完全导致的吧,6500是你的目的片段,下面的是没有切开的质粒,跑得比较快,个人看法,仅供参考。
3楼2011-03-28 15:20:03
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另一个天堂

金虫 (小有名气)


liuwei78(金币+3): 2011-03-29 09:09:18
是不是酶切时间过短了,你可以参考一下
4楼2011-03-28 15:23:52
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