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liuwei78

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】大家帮忙看一张电泳图

这是张单酶切的电泳图。我原来的质粒大小是5700bp左右，预计插入一个817bp的片段。连接转化后挑了六个单菌落，其中有三个菌液PCR有预期结果。然后我就提质粒单酶切。结果竟然都有两三个条带，不知道问题出在哪？而且从条带位置上看，中间一个条带的位置是我预期的6500多bp。求大家帮忙分析下。

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1楼2011-03-28 10:44:04

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傻子

木虫 (正式写手)

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酶切不完全吧，不知道其他虫子的酶切如何，我自己做的确实没切完全过，都带有质粒条带，这样的话，就首先包括质粒条带——这里可能包括1-3条带，此外，是酶切后的条带——不定，如需确定条带，你首先需要在酶切前，仔细核对PCR产物和质粒的序列，是否在这些片段中只有单个酶切位点，然后做出预测。这通过DNAMAN这类可以分析下。然后，多重复几次吧