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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】RT-PCR羊3K基因
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】RT-PCR羊3K基因已有4人参与

看到很多虫友都说，3kb是小意思，但是我的就是2kb的能扩出来，3kb的就不可以了

我的目的是做原核表达的

开始用的全式金的RT-PCR试剂盒，可以分段扩出来，测序后，现在准备整段扩出来，连载体，但是就是整段扩不出来

换了EX TAQ，问题更大，连2kb的都扩不出来

试过，模板应该没有问题，是羊肝脏RNA发转录的，请问大家这是什么原因吗？
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1楼2011-03-22 10:31:35
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liyuy0921

木虫 (正式写手)

学习学习

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
全式金的RT-PCR试剂盒里的酶是TransTaq HiFi DNA Polymerase吧……这个酶可以媲美TAKARA的LaTaq!!!结果你换成了TAKARA的ex-Taq，当然啥也扩不出来了……
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4楼2011-04-10 17:07:18
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
欢迎楼下的帮解，，，，
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一品黄山
2楼2011-03-22 10:47:22
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3): 好办法，欢迎常来哦 2011-03-22 13:40:24
这个你确定RNA没问题的话，用TAKARA的LA TAQ试一下，既然你能分段扩增出来，你下一步可以这样做，设计一段和你这两段片段重叠的引物，然后用拼接PCR得到整个基因，当然一定要用pfu酶，加A的是不行的，会移码，好运
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3楼2011-03-22 11:06:51
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liyuy0921 at 2011-04-10 17:07:18:
全式金的RT-PCR试剂盒里的酶是TransTaq HiFi DNA Polymerase吧……这个酶可以媲美TAKARA的LaTaq!!!结果你换成了TAKARA的ex-Taq，当然啥也扩不出来了……

这样啊，那我还用全式金的扩吗“？
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5楼2011-04-11 08:35:42
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