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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】RT-PCR羊3K基因 已有4人参与

看到很多虫友都说,3kb是小意思,但是我的就是2kb的能扩出来,3kb的就不可以了

我的目的是做原核表达的

开始用的全式金的RT-PCR试剂盒,可以分段扩出来,测序后,现在准备整段扩出来,连载体,但是就是整段扩不出来

换了EX TAQ,问题更大,连2kb的都扩不出来

试过,模板应该没有问题,是羊肝脏RNA发转录的,请问大家这是什么原因吗?
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ls2046

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
欢迎楼下的帮解,,,,
一品黄山
2楼2011-03-22 10:47:22
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yabxxh

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3): 好办法,欢迎常来哦 2011-03-22 13:40:24
这个你确定RNA没问题的话,用TAKARA的LA TAQ试一下,既然你能分段扩增出来,你下一步可以这样做,设计一段和你这两段片段重叠的引物,然后用拼接PCR得到整个基因,当然一定要用pfu酶,加A的是不行的,会移码,好运
3楼2011-03-22 11:06:51
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liyuy0921

木虫 (正式写手)

学习学习


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全式金的RT-PCR试剂盒里的酶是TransTaq HiFi DNA Polymerase吧……这个酶可以媲美TAKARA的LaTaq!!!结果你换成了TAKARA的ex-Taq,当然啥也扩不出来了……
4楼2011-04-10 17:07:18
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tongxinkxy

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by liyuy0921 at 2011-04-10 17:07:18:
全式金的RT-PCR试剂盒里的酶是TransTaq HiFi DNA Polymerase吧……这个酶可以媲美TAKARA的LaTaq!!!结果你换成了TAKARA的ex-Taq,当然啥也扩不出来了……

这样啊,那我还用全式金的扩吗“?
5楼2011-04-11 08:35:42
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liyuy0921

木虫 (正式写手)

可以试试TAKARA的LA-taq


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可以试试TAKARA的LA-taq,全式金你也可以试试……
6楼2011-04-15 18:34:04
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liyuy0921

木虫 (正式写手)


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突然看到了全式金还有个TransStart Taq,扩增效率更高,你可以问你们那里的全式金代理要个试用装试试看……
7楼2011-04-29 23:41:29
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