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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么我的DNA提的很少？
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冰鱼儿

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】为什么我的DNA提的很少？ 已有4人参与

我提的是真菌的DNA ，用的是CTAB法，提了三次，结果都不怎么好，最多也就40ng/μl,少的个位数，纯度也很小，最高就1.58，不知道怎么回事?
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1楼 2011-03-20 20:36:02
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冰鱼儿

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2011-03-21 00:54:17:
材料的状态很重要吧，如果菌丝比较老，DNA质量不会好。

我的菌培养差不多两星期了，不知道是不是时间太久了？合适的时间应该是几天呢？还请指教
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8楼2011-03-21 13:54:28
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zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 多帮忙哦。 2011-03-20 22:02:37
关键及步骤要注意，protocol上有说明
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2楼2011-03-20 20:43:52
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冰鱼儿

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhouxj at 2011-03-20 20:43:52:
关键及步骤要注意，protocol上有说明

这个protocol是什么啊 ？
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3楼2011-03-20 20:53:15
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zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
翱宇(金币+2): 很热心啊，鼓励下！ 2011-03-21 00:02:20
引用回帖:
Originally posted by 冰鱼儿 at 2011-03-20 20:36:02:
我提的是真菌的DNA ，用的是CTAB法，提了三次，结果都不怎么好，最多也就40ng/μl,少的个位数，纯度也很小，最高就1.58，不知道怎么回事?

1.        将适量样品置于研钵中，倒入液氮，液氮蒸发后，迅速将样品研磨成粉末。
2.        将样品粉末转移到含4ml CTAB缓冲液的65℃灭菌离心管中，65℃下温育20 min，每隔10 min颠倒几次，使样品混匀。

3.        加入4ml CIA（氯仿：异戊醇=24:1）（在通风橱中进行，并将未盖的管放置1-2 min，防止管盖被冲开），盖管，轻微震荡混合20min.。

4.        4℃下，10000转离心10 min。

5.        小心移取上层水相（不要将有机相和细胞碎片混入），重复用氯仿/戊醇抽提一次。

6.        第二次氯仿/异戊醇清洗后，移取水相，加入4ml异丙醇，轻微颠倒试管几次使样品混匀，置冰上5min，使核酸充分沉淀。

7.        4℃ 10000转离心10 min。

8.        弃上清，在吸水纸上倒置15 min，排干水分。

9.        70%乙醇清洗沉淀2次。

10.    用500µl TE溶解沉淀
网上找的，原因很多，不知道你用的试剂盒还是自己配置试剂。搞明白每步的目的就知道哪些该注意了 希望好运
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5楼2011-03-20 22:29:36
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