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【求助/交流】为什么我的DNA提的很少？ 已有4人参与
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我提的是真菌的DNA ，用的是CTAB法，提了三次，结果都不怎么好，最多也就40ng/μl,少的个位数，纯度也很小，最高就1.58，不知道怎么回事? |
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3楼2011-03-20 20:53:15
zhouxj
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2楼2011-03-20 20:43:52
zhouxj
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
翱宇(金币+2): 很热心啊，鼓励下！ 2011-03-21 00:02:20
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1. 将适量样品置于研钵中，倒入液氮，液氮蒸发后，迅速将样品研磨成粉末。 2. 将样品粉末转移到含4ml CTAB缓冲液的65℃灭菌离心管中，65℃下温育20 min，每隔10 min颠倒几次，使样品混匀。 3. 加入4ml CIA（氯仿：异戊醇=24:1）（在通风橱中进行，并将未盖的管放置1-2 min，防止管盖被冲开），盖管，轻微震荡混合20min.。 4. 4℃下，10000转离心10 min。 5. 小心移取上层水相（不要将有机相和细胞碎片混入），重复用氯仿/戊醇抽提一次。 6. 第二次氯仿/异戊醇清洗后，移取水相，加入4ml异丙醇，轻微颠倒试管几次使样品混匀，置冰上5min，使核酸充分沉淀。 7. 4℃ 10000转离心10 min。 8. 弃上清，在吸水纸上倒置15 min，排干水分。 9. 70%乙醇清洗沉淀2次。 10. 用500µl TE溶解沉淀 网上找的，原因很多，不知道你用的试剂盒还是自己配置试剂。搞明白每步的目的就知道哪些该注意了 希望好运 |
5楼2011-03-20 22:29:36
7楼2011-03-21 00:54:17