24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 826  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

冰鱼儿

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】为什么我的DNA提的很少?已有4人参与

我提的是真菌的DNA ,用的是CTAB法,提了三次,结果都不怎么好,最多也就40ng/μl,少的个位数,纯度也很小,最高就1.58,不知道怎么回事?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 冰鱼儿 at 2011-03-20 20:36:02:
我提的是真菌的DNA ,用的是CTAB法,提了三次,结果都不怎么好,最多也就40ng/μl,少的个位数,纯度也很小,最高就1.58,不知道怎么回事?

材料的状态很重要吧,如果菌丝比较老,DNA质量不会好。
7楼2011-03-21 00:54:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1): 多帮忙哦。 2011-03-20 22:02:37
关键及步骤要注意,protocol上有说明
2楼2011-03-20 20:43:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰鱼儿

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zhouxj at 2011-03-20 20:43:52:
关键及步骤要注意,protocol上有说明

这个protocol是什么啊 ?
3楼2011-03-20 20:53:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouxj

至尊木虫 (文坛精英)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
翱宇(金币+2): 很热心啊,鼓励下! 2011-03-21 00:02:20
引用回帖:
Originally posted by 冰鱼儿 at 2011-03-20 20:36:02:
我提的是真菌的DNA ,用的是CTAB法,提了三次,结果都不怎么好,最多也就40ng/μl,少的个位数,纯度也很小,最高就1.58,不知道怎么回事?

1.        将适量样品置于研钵中,倒入液氮,液氮蒸发后,迅速将样品研磨成粉末。
2.        将样品粉末转移到含4ml CTAB缓冲液的65℃灭菌离心管中,65℃下温育20 min,每隔10 min颠倒几次,使样品混匀。

3.        加入4ml CIA(氯仿:异戊醇=24:1)(在通风橱中进行,并将未盖的管放置1-2 min,防止管盖被冲开),盖管,轻微震荡混合20min.。

4.        4℃下,10000转离心10 min。

5.        小心移取上层水相(不要将有机相和细胞碎片混入),重复用氯仿/戊醇抽提一次。

6.        第二次氯仿/异戊醇清洗后,移取水相,加入4ml异丙醇,轻微颠倒试管几次使样品混匀,置冰上5min,使核酸充分沉淀。

7.        4℃ 10000转离心10 min。

8.        弃上清,在吸水纸上倒置15 min,排干水分。

9.        70%乙醇清洗沉淀2次。

10.    用500µl TE溶解沉淀
网上找的,原因很多,不知道你用的试剂盒还是自己配置试剂。搞明白每步的目的就知道哪些该注意了 希望好运
5楼2011-03-20 22:29:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见