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铜虫 (正式写手)

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[交流] 【求助】有关DEAE装柱问题

初来咋到的我现在用DEAE-纤维素纯化粗多糖，上玻璃柱，有关填料用量与所上样品的量之间该怎么样处理？
还有这种填料装柱前预处理和装柱要求该怎么样。还有怎么样解决洗脱慢这个问题？需要做分级接收吗？谢谢了。

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1楼 2011-03-19 20:40:19

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回首天涯2015

银虫 (小有名气)

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★
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我也在做这个，柱子是【1，60】的，用40g纤维素。
（1）DE52阴离子交换剂干粉处理
先将30g的DE52阴离子交换剂干粉倒入250ml烧杯中，加入 150ml蒸馏水浸泡3h，去除杂质；再在150ml的0.5M的HCL溶液中浸泡1－2h,再用无离子水或蒸馏水洗至pH值中性或PH4以上，并将其在抽滤漏斗中抽干；将抽干的离子交换剂浸泡在150ml的0.5M的NaOH溶液中1－2h，再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。
(2) DEAE－纤维素52装柱（2cm,50cm）
将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有的柱材，轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢沉降再层析柱底部，凝胶沉积直到离层析柱上端1.5－2cm处，停止装柱，然后再用0.5M的NaOH淋洗2-3柱体积（约30ml），最后用水洗淋洗至流出液pH值显中性即可。