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aloneever

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助】琼脂糖凝胶装柱问题

最近在用一个琼脂糖凝胶,给多糖分级。因为以前没有做过,没什么经验,柱子装了一个星期都没有装好,总是上样的时候,顺着避流下来,就一条色带。
我的装柱过程是这样的:
先将凝胶抽干(买来时20%乙醇浸泡的),用大概凝胶:水=3:1的水溶胀2h,最后搅拌程糊状,湿法装柱,静置沉降一夜。第二天用蠕动泵低流速(低于2ml/min,柱直径2.6cm)平衡柱子5h左右。然后湿法上样
请大家帮们分析,分析问题出在哪,怎么解决?
谢谢了
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aloneever

金虫 (正式写手)


这么快就沉了啊,顶到高手出现!
2楼2011-01-04 11:12:00
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ylchen0902

金虫 (正式写手)



chzhbin(金币+1):给个红包,谢谢回帖交流 2011-01-05 14:45:37
aloneever(金币+2): 2011-01-05 17:26:52
胶要先溶胀好,脱气后再装柱子,上样后成一条线是因为你柱子没装好,柱效不好,平衡的时候静水压就可以,最好平衡一夜
3楼2011-01-05 14:36:58
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aloneever

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by ylchen0902 at 2011-01-05 14:36:58:
胶要先溶胀好,脱气后再装柱子,上样后成一条线是因为你柱子没装好,柱效不好,平衡的时候静水压就可以,最好平衡一夜

我用的是琼脂糖凝胶6FF,技术人员说这款凝胶不用溶胀的。买来就是20%乙醇浸泡的。是这么回事吗? 我柱直径2.6,柱高大概35cm。静压流速大概0.5ml/min,特别慢,这正常吗?
4楼2011-01-05 17:29:33
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ylchen0902

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by aloneever at 2011-01-05 17:29:33:

我用的是琼脂糖凝胶6FF,技术人员说这款凝胶不用溶胀的。买来就是20%乙醇浸泡的。是这么回事吗? 我柱直径2.6,柱高大概35cm。静压流速大概0.5ml/min,特别慢,这正常吗?

一般所有的胶买来都是在20%乙醇保存的,你最好是在装柱子之前用你的流动相将乙醇置换出来,溶胀一下,以防止装柱子后再换流动相后胶会溶胀。像你说的这种柱子0.5的流速确实有点慢,你最好再重新装一下。还有一般多糖分级使用长点的柱子比较好(2.6*100cm)
5楼2011-01-07 10:53:41
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henghuibio

新虫 (小有名气)


琼脂糖凝胶 装柱方法


karl2100(金币+1): 多谢提供! 2011-01-26 15:56:38
在固定好的层析柱中加入约1/3体积的缓冲液,关闭柱出口,在柱顶部连续加入已经充分平衡好的琼脂糖凝胶(事先把凝胶调成流动性较好的糊状物),待凝胶沉降约3cm时打开出口,并连续加入糊状的凝胶,使其在形成的胶粒床面上连续均匀的沉降,直至凝胶完全沉降至适当的柱床体积为止。然后关闭出口,使上层有3cm高的缓冲液并在整个层析过程中一直维持,不能使柱子走空。为了防止柱床表面不会由于溶剂或样品的加入而引起搅动,要在柱床表面加一个保护装置,如圆形滤纸片或纱网等。

希望对你有帮助哈!
6楼2011-01-25 14:21:41
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sdlj_2009

银虫 (小有名气)


★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
karl2100(金币+1): 多谢指教! 2011-11-07 23:49:41
调糊也应注意。我是静置,倒出上清,加水摇起,静置倒出上清,几次后认为替换成水了。用胶体积与整体积的约为60%时,摇匀装柱较好,不浓也不希。
7楼2011-11-07 18:53:35
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cchldu

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的流速是用蠕动泵控制的吗?转速大概多少啊?
8楼2014-09-24 11:10:57
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清风明月~

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问琼脂糖凝胶如何装柱

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2018-12-09 16:06:15
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