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【求助】琼脂糖凝胶装柱问题
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最近在用一个琼脂糖凝胶,给多糖分级。因为以前没有做过,没什么经验,柱子装了一个星期都没有装好,总是上样的时候,顺着避流下来,就一条色带。 我的装柱过程是这样的: 先将凝胶抽干(买来时20%乙醇浸泡的),用大概凝胶:水=3:1的水溶胀2h,最后搅拌程糊状,湿法装柱,静置沉降一夜。第二天用蠕动泵低流速(低于2ml/min,柱直径2.6cm)平衡柱子5h左右。然后湿法上样 请大家帮们分析,分析问题出在哪,怎么解决? 谢谢了 |
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5楼2011-01-07 10:53:41
琼脂糖凝胶 装柱方法
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karl2100(金币+1): 多谢提供! 2011-01-26 15:56:38
karl2100(金币+1): 多谢提供! 2011-01-26 15:56:38
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在固定好的层析柱中加入约1/3体积的缓冲液,关闭柱出口,在柱顶部连续加入已经充分平衡好的琼脂糖凝胶(事先把凝胶调成流动性较好的糊状物),待凝胶沉降约3cm时打开出口,并连续加入糊状的凝胶,使其在形成的胶粒床面上连续均匀的沉降,直至凝胶完全沉降至适当的柱床体积为止。然后关闭出口,使上层有3cm高的缓冲液并在整个层析过程中一直维持,不能使柱子走空。为了防止柱床表面不会由于溶剂或样品的加入而引起搅动,要在柱床表面加一个保护装置,如圆形滤纸片或纱网等。 希望对你有帮助哈! |
6楼2011-01-25 14:21:41
7楼2011-11-07 18:53:35
8楼2014-09-24 11:10:57
9楼2018-12-09 16:06:15












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