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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 【求助】琼脂糖凝胶装柱问题
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aloneever

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】琼脂糖凝胶装柱问题

最近在用一个琼脂糖凝胶，给多糖分级。因为以前没有做过，没什么经验，柱子装了一个星期都没有装好，总是上样的时候，顺着避流下来，就一条色带。
我的装柱过程是这样的：
先将凝胶抽干（买来时20%乙醇浸泡的），用大概凝胶：水=3：1的水溶胀2h，最后搅拌程糊状，湿法装柱，静置沉降一夜。第二天用蠕动泵低流速（低于2ml/min，柱直径2.6cm）平衡柱子5h左右。然后湿法上样
请大家帮们分析，分析问题出在哪，怎么解决?
谢谢了
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1楼 2011-01-04 10:15:57
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aloneever

金虫 (正式写手)
这么快就沉了啊，顶到高手出现！
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2楼2011-01-04 11:12:00
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ylchen0902

金虫 (正式写手)
★
chzhbin(金币+1):给个红包，谢谢回帖交流 2011-01-05 14:45:37
aloneever(金币+2): 2011-01-05 17:26:52
胶要先溶胀好，脱气后再装柱子，上样后成一条线是因为你柱子没装好，柱效不好，平衡的时候静水压就可以，最好平衡一夜
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3楼2011-01-05 14:36:58
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aloneever

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by ylchen0902 at 2011-01-05 14:36:58:
胶要先溶胀好，脱气后再装柱子，上样后成一条线是因为你柱子没装好，柱效不好，平衡的时候静水压就可以，最好平衡一夜

我用的是琼脂糖凝胶6FF，技术人员说这款凝胶不用溶胀的。买来就是20%乙醇浸泡的。是这么回事吗？ 我柱直径2.6，柱高大概35cm。静压流速大概0.5ml/min,特别慢，这正常吗？
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4楼2011-01-05 17:29:33
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ylchen0902

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by aloneever at 2011-01-05 17:29:33:

我用的是琼脂糖凝胶6FF，技术人员说这款凝胶不用溶胀的。买来就是20%乙醇浸泡的。是这么回事吗？ 我柱直径2.6，柱高大概35cm。静压流速大概0.5ml/min,特别慢，这正常吗？

一般所有的胶买来都是在20%乙醇保存的，你最好是在装柱子之前用你的流动相将乙醇置换出来，溶胀一下，以防止装柱子后再换流动相后胶会溶胀。像你说的这种柱子0.5的流速确实有点慢，你最好再重新装一下。还有一般多糖分级使用长点的柱子比较好（2.6*100cm）
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5楼2011-01-07 10:53:41
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henghuibio

新虫 (小有名气)

琼脂糖凝胶 装柱方法

★
karl2100(金币+1): 多谢提供！ 2011-01-26 15:56:38
在固定好的层析柱中加入约1/3体积的缓冲液，关闭柱出口，在柱顶部连续加入已经充分平衡好的琼脂糖凝胶（事先把凝胶调成流动性较好的糊状物），待凝胶沉降约3cm时打开出口，并连续加入糊状的凝胶，使其在形成的胶粒床面上连续均匀的沉降，直至凝胶完全沉降至适当的柱床体积为止。然后关闭出口，使上层有3cm高的缓冲液并在整个层析过程中一直维持，不能使柱子走空。为了防止柱床表面不会由于溶剂或样品的加入而引起搅动，要在柱床表面加一个保护装置，如圆形滤纸片或纱网等。

希望对你有帮助哈！
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6楼2011-01-25 14:21:41
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sdlj_2009

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
karl2100(金币+1): 多谢指教！ 2011-11-07 23:49:41
调糊也应注意。我是静置，倒出上清，加水摇起，静置倒出上清，几次后认为替换成水了。用胶体积与整体积的约为60%时，摇匀装柱较好，不浓也不希。
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7楼2011-11-07 18:53:35
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cchldu

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的流速是用蠕动泵控制的吗？转速大概多少啊？
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8楼2014-09-24 11:10:57
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清风明月～

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问琼脂糖凝胶如何装柱

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2018-12-09 16:06:15
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