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雪人也怕冷

铜虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】western blot

求助:转膜后,丽春红染色条带很明显,5%脱脂奶粉过夜,一抗(TBST稀释2-1000)孵育4°过夜,TBST洗三次,二抗(TBST稀释0.5--1000),涂AB液,显色后为白板,什么条带都没有。是哪里出了问题?是不是没有曝光就说明显影定影液没问题?AB液刚买的新的,也应该没问题,高手帮分析分析啊,谢谢啦'
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leilaye

铜虫 (小有名气)



雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
15楼: Originally posted by qingyuansw20 at 2011-03-21 23:19:15:
1.转膜后直接封闭,不要染什么色了。
2.1抗2抗封闭蛋白面要向下(无论你用什么方法),还不能漏出一抗二抗。
3.1抗要4°过夜效果更好。
4.内参出条带了吗?内参要是出了。就是你1抗问题,浓度低了。来个1:200试 ...

对于2,蛋白面向下会不会摇床摇得把蛋白磨掉了,我之前都是向上 可以做出来。。。。。。。。。。。。不过最近没有条带,运气衰死了。。
35楼2012-02-16 11:03:15
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)


★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:08
雪人也怕冷(金币+1): 2011-03-22 11:13:37
你是不应该有两块胶,一块儿用于染色观察条带是否明显且有无特异带。第二块儿用于转膜杂交,确定杂交信号。
现在是你的杂交结果没信号,若排除显色问题,就是你的跑胶或转膜出了披露。
5楼2011-03-18 22:09:44
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1992xlliu

金虫 (小有名气)


★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:18
估计洗丽春红的过程中蛋白被洗掉了。
6楼2011-03-18 22:44:52
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libin051mail

铜虫 (初入文坛)


★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:14
雪人也怕冷(金币+1): 2011-03-22 11:13:55
首先考虑一抗是否合理
其次二抗是否抗一抗
7楼2011-03-18 23:17:09
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