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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】western blot
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雪人也怕冷

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】western blot

求助：转膜后，丽春红染色条带很明显，5%脱脂奶粉过夜，一抗（TBST稀释2-1000）孵育4°过夜，TBST洗三次，二抗（TBST稀释0.5--1000），涂AB液，显色后为白板，什么条带都没有。是哪里出了问题？是不是没有曝光就说明显影定影液没问题？AB液刚买的新的，也应该没问题，高手帮分析分析啊，谢谢啦'
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1楼 2011-03-18 16:15:26
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qingyuansw20

金虫 (小有名气)
★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
雪人也怕冷(金币+2): 谢谢 2011-03-22 11:16:24
1.转膜后直接封闭，不要染什么色了。
2.1抗2抗封闭蛋白面要向下（无论你用什么方法），还不能漏出一抗二抗。
3.1抗要4°过夜效果更好。
4.内参出条带了吗？内参要是出了。就是你1抗问题，浓度低了。来个1:200试试吧。
5.做wb要看运气的。
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15楼2011-03-21 23:19:15
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冬虫夏草1

金虫 (小有名气)
★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:08
雪人也怕冷(金币+1): 2011-03-22 11:13:37
你是不应该有两块胶，一块儿用于染色观察条带是否明显且有无特异带。第二块儿用于转膜杂交，确定杂交信号。
现在是你的杂交结果没信号，若排除显色问题，就是你的跑胶或转膜出了披露。
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5楼2011-03-18 22:09:44
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1992xlliu

金虫 (小有名气)
★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:18
估计洗丽春红的过程中蛋白被洗掉了。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-03-18 22:44:52
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libin051mail

铜虫 (初入文坛)
★ ★
雪人也怕冷(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-19 09:39:14
雪人也怕冷(金币+1): 2011-03-22 11:13:55
首先考虑一抗是否合理
其次二抗是否抗一抗
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2011-03-18 23:17:09
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