[交流] 【求助/交流】有关氯仿-异戊醇

Originally posted by xwsooo at 2011-03-17 11:11:55:
还有一个问题：我是用碘化钠法提取外周血DNA，我发现配的碘化钠溶液（棕色瓶中，避光保存）一个礼拜就貌似变氧化了（变成黄色了），不知道有什么解决办法？？

Originally posted by yesucao at 2011-03-17 15:31:22:
我提过细菌的DNA，氯仿-异戊醇只是抽提时用的，是分成两层，收集上清就可以了啊，再加其他的东西沉淀DNA。

Originally posted by kyoya at 2011-03-17 20:25:39:
氯仿与其他试剂不互溶的，而且密度大，可定会在下层的。你只要把沉淀上层的上清液提取出来就行了！

Originally posted by xwsooo at 2011-03-17 10:22:04:
我配的氯仿：异戊醇（24:1）用来提DNA，以前做的没什么大问题，不知道最近为什么加完氯仿异戊醇，漩涡震荡15s后，离心后，蛋白质层不能完全离心沉淀下去（分成了两层）？试剂也刚配过不久，不知道怎么突然这样了， ...

Originally posted by weishengsu5 at 2011-03-18 09:55:07:

Originally posted by shan-sa at 2011-03-19 17:11:40:
充分混匀一下~

Originally posted by xwsooo at 2011-03-17 21:22:04:
这个我明白，氯仿是使蛋白质变性，异戊醇能减少震荡产生气泡，问题是抽提后后拿去离心，本应该蛋白质（中间层）和水相（上层）分清楚，可是最近不知道为什么蛋白质往往有些混到水相上面了，也就是蛋白质没有完全 ...

Originally posted by yesucao at 2011-03-19 19:46:39:
抽提两次呢？试过没？？

Originally posted by 辛雨237 at 2011-03-19 20:16:54:
蛋白质层在中间也正常啊

Originally posted by xwsooo at 2011-03-20 15:25:08:
问题是蛋白质经常混到水相那层，造成吸取上清时很不好弄

Originally posted by 辛雨237 at 2011-03-20 18:13:42:
你用多大转速离心啊

Originally posted by xwsooo at 2011-03-21 08:46:15:
12,000rpm，10min

Originally posted by 辛雨237 at 2011-03-21 09:04:40:
不知道你提的什么的基因组，如果是海洋生物的话，DNA是不太好提

Originally posted by zhangxn2010 at 2011-03-22 12:25:06:
氯仿/异戊醇肯定会互溶，我觉得可能是时间太长了，试剂不能充分使蛋白变性，建议使用新配置的。
还有，其实你取上清就行，尽量不吸到蛋白，或者来个二次离心。