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609351499

银虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】求解蛋白质分离纯化的难题

大家好，最近在做蛋白质的分离纯化实验，实验中遇到了一些难题，还请高手指点。
我做真菌产一种酶的分离纯化，但是该菌也产很多多糖，不知用什么办法除去？
对发酵液盐析的蛋白质实验时，经过离心，得到的片状物浮在液面上，管底部液体澄清，没有沉淀，请问这是什么原因，怎么解决？Sample Text

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1楼 2011-03-11 18:15:09

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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

发酵液中加入硫酸铵达到一定的饱和度之后，理论上是绝对有蛋白质沉淀下来的，即使没有蛋白质沉淀，那至少发酵液里的菌丝碎片和培养基不溶成分也会沉淀。没有沉淀就说明沉淀跑到液体上层去了。这令我想到一个现象，双水相。

硫酸铵是无机盐，达到一定浓度时会与一些有机物形成双水相，上相为有机相，下相为无机相。

建议尝试一下双水相去除发酵液杂质和有机杂质，之后无机相继续加入硫酸铵盐析。这样，碎片、色素、有机物、杂质蛋白质都能去除很多。

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9楼2011-03-11 21:49:21

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~明晓溪~

木虫 (正式写手)

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★
609351499(金币+2):谢谢参与

我也遇到同样的事情，实际上那些漂浮物可以丢掉了，估计是一些多糖，你不放心的话，跑个电泳看看。我觉的管壁上多少会有些蛋白的，你洗洗看看。

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3楼2011-03-11 18:35:22

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zhengfan1109

银虫 (正式写手)

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★
609351499(金币+2):谢谢参与

引用回帖:

Originally posted by 609351499 at 2011-03-11 18:15:09:
大家好，最近在做蛋白质的分离纯化实验，实验中遇到了一些难题，还请高手指点。
我做真菌产一种酶的分离纯化，但是该菌也产很多多糖，不知用什么办法除去？
对发酵液盐析的蛋白质实验时，经过离心，得到 ...

走一次凝胶色谱试试，分离到的组分测下糖的含量。

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4楼2011-03-11 20:46:55

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