应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎样设计目的基因的引物
51/1返回列表
查看: 2332  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

vs570588

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】怎样设计目的基因的引物

我自己驯化的微生物，想设计一对引物，来测定微生物合成某种特殊酶的情况。这种酶的基因可以从NCBI中查到。我打算合成这种引物来做定量PCR。我是初学者，能详细给我介绍一下过程。也看到别人设计的引物，但定量PCR下来并不是很理想。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-09 21:04:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vs570588

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by nininini at 2011-03-09 21:50:36:
做定量PCR的话目的序列大概在80~150bp就好了~~可以根据NCBI的序列查找一下保守序列，通过RNA序列分析挑选无二级结构的区段进行设计就好了~引物25个左右的bp吧，别太短，引物的特异性挺关键的

说真的降解现在我要处理的污染物微生物种类较多，我不是学生物出身的，搞水处理的，所以我也不知道怎样找保守序列，怎样算保守序列，我现在只能从NCBI中找到这种酶的序列，序列长度大约为1500个碱基左右。附图就是文献上设计引物时用到许多不同细菌表达这种酶的基因。你能给过我举个例子吗？
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-10 10:26:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

nininini

银虫 (小有名气)
★ ★
最爱花诗雨(金币+2): good 2011-03-10 17:16:09
做定量PCR的话目的序列大概在80~150bp就好了~~可以根据NCBI的序列查找一下保守序列，通过RNA序列分析挑选无二级结构的区段进行设计就好了~引物25个左右的bp吧，别太短，引物的特异性挺关键的
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-09 21:50:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangleisdnu

金虫 (正式写手)
you should use some soft ware like clonemanager to design, to make your interested gene primers and the internal control gene primers have the similar annealing temperature
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-09 21:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
★ ★
最爱花诗雨(金币+2): 嗯，引物设计的软件很多，可以找一个自己喜欢的 2011-03-10 17:17:08
用PrimeExpress设计,结果可以和NCBI上的primeblast检测是否特异
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-03-10 01:19:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 20:40 by jyNB2vrbdUpR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 20:31 by jyNB2vrbdUpR
[考博] 找导师 +7 yuanjiabao 2026-08-29 8/400 2026-09-03 20:15 by yinnelly
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 5/250 2026-09-03 20:09 by jyNB2vrbdUpR
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 9/450 2026-09-03 20:07 by jyNB2vrbdUpR
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +3 jackleilei 2026-09-03 3/150 2026-09-03 19:13 by god_tian
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 11/550 2026-09-03 18:42 by jyNB2vrbdUpR
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 rFEsUBKXRll0 2026-09-02 6/300 2026-09-03 16:49 by T0rGB46095mJ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 10/500 2026-09-03 16:27 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +10 雨打竹帘 2026-08-30 14/700 2026-09-03 13:17 by qsd10086
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 12:03 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭