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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】关于引物设计的问题
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王有朝

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于引物设计的问题

DNA不是包含内含子吗。NCBI给出的序列包括内含子序列吗？如果包括内含子序列那么我们对一个基因扩增是不是要提取全RNA反转录成cDNA后再设计引物对这一基因进行扩增？还是直接通过NCBI上的序列设计引物进行扩增？
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1楼 2011-03-03 17:10:45
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-05 00:45:31
前体rna含有内含子，直接通过NCBI上的序列设计引物进行扩增
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2楼2011-03-03 18:36:48
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夏尔list

金虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-05 00:45:35
NCBI给的序列是mRNA~Blast得到DNA序列~扩基因就是你说的提RNA反转再设计引物~
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3楼2011-03-03 18:57:23
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王有朝

新虫 (小有名气)

你好

引用回帖:
Originally posted by 夏尔list at 2011-03-03 18:57:23:
NCBI给的序列是mRNA~Blast得到DNA序列~扩基因就是你说的提RNA反转再设计引物~

我的意思还是没表达明白。我要扩增一个基因的片段（不用克隆到整个基因），那我是直接提DNA进行扩增还是提RNA进行反转录再扩增？
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4楼2011-03-04 22:03:58
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elyn-yu

木虫 (初入文坛)
一般都是逆转成cDNA以后再进行扩增的。
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5楼2011-03-05 10:00:39
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夏尔list

金虫 (著名写手)
王有朝(金币+2): 谢谢 2011-03-06 20:50:55
引用回帖:
Originally posted by 王有朝 at 2011-03-04 22:03:58:
我的意思还是没表达明白。我要扩增一个基因的片段（不用克隆到整个基因），那我是直接提DNA进行扩增还是提RNA进行反转录再扩增？

在NCBI上比对，看你的基因有没有内含子，没有内含子的话直接DNA，有内含子的话当然是提RNA然后反转录了。
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6楼2011-03-05 10:44:58
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