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tutufei

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】细菌总RNA的提取和RT-PCR

1.第一次做细菌总RNA的提取，很担心RNA会降解，请问需要注意哪些？
（菌体培养阶段所用的器皿，枪头需要DEPC水浸泡吗，还是从菌体离心开始提取RNA时才要求所有东西要RNase-free？）
2.我只要检测RNA的转录情况，只需要反转录成CDNA的第一链，帮忙推荐下RT-PCR试剂盒，哪个公司的好用？

[ Last edited by tutufei on 2011-3-2 at 18:20 ]

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1楼 2011-03-02 18:09:18

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elyn-yu

木虫 (初入文坛)

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★
翱宇(金币+1): 鼓励交流！ 2011-03-05 14:59:16

操作尽量在冰上，我们枪头之类的用得都是RNase Free的，一定要带口罩和手套。
我们一直用Fermentas的逆转录试剂盒，感觉不错。

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8楼2011-03-05 10:07:10

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zhengfan1109

银虫 (正式写手)

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★ ★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-02 18:48:44
翱宇(金币+1): 鼓励交流！ 2011-03-05 14:58:55
tutufei(金币+3): 谢谢 2011-03-12 11:37:13

引用回帖:

Originally posted by tutufei at 2011-03-02 18:09:18:
1.第一次做细菌总RNA的提取，很担心RNA会降解，请问需要注意哪些？
（菌体培养阶段所用的器皿，枪头需要DEPC水浸泡吗，还是从菌体离心开始提取RNA时才要求所有东西要RNase-free？）
2.我只要检测RNA的转录情况， ...

注意事项比较多，从提取阶段开始，培养阶段正常就行。所有枪头，离心管都要用DEPC水浸泡，灭菌。如果要做电泳，电泳槽也用DEPC水浸泡一下更好。

如果只要第一链，那用两步法就行，我当时用的是PROMIGA公司的逆转录酶，而且没用试剂盒，DIY。效果不错。

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2楼2011-03-02 18:23:25

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