应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细菌总RNA的提取和RT-PCR
51/1返回列表
查看: 2473  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tutufei

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细菌总RNA的提取和RT-PCR

1.第一次做细菌总RNA的提取，很担心RNA会降解，请问需要注意哪些？
（菌体培养阶段所用的器皿，枪头需要DEPC水浸泡吗，还是从菌体离心开始提取RNA时才要求所有东西要RNase-free？）
2.我只要检测RNA的转录情况，只需要反转录成CDNA的第一链，帮忙推荐下RT-PCR试剂盒，哪个公司的好用？

[ Last edited by tutufei on 2011-3-2 at 18:20 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-02 18:09:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tdong06

木虫 (正式写手)
我也要做，有没有高手提供多点细节啊？注意事项等等。越详细越好！
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-02 23:11:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-02 18:48:44
翱宇(金币+1): 鼓励交流！ 2011-03-05 14:58:55
tutufei(金币+3): 谢谢 2011-03-12 11:37:13
引用回帖:
Originally posted by tutufei at 2011-03-02 18:09:18:
1.第一次做细菌总RNA的提取，很担心RNA会降解，请问需要注意哪些？
（菌体培养阶段所用的器皿，枪头需要DEPC水浸泡吗，还是从菌体离心开始提取RNA时才要求所有东西要RNase-free？）
2.我只要检测RNA的转录情况， ...

注意事项比较多，从提取阶段开始，培养阶段正常就行。所有枪头，离心管都要用DEPC水浸泡，灭菌。如果要做电泳，电泳槽也用DEPC水浸泡一下更好。

如果只要第一链，那用两步法就行，我当时用的是PROMIGA公司的逆转录酶，而且没用试剂盒，DIY。效果不错。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-03-02 18:23:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与~~~ 2011-03-02 21:30:35
菌体培养阶段所用的器皿不用，枪头等接触rna的器皿都需要处理，fermentas，宝生物的，都不错
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-03-02 21:23:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nininini

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+4): 鼓励新虫交流，欢迎常来 2011-03-03 16:51:06
tutufei(金币+10): 很详细，谢谢 2011-03-12 11:40:17
简单说说我的一点儿建议吧
首先菌体培养很重要，一定要做了种子液，菌体状态不好RNA肯定质量不高；
关于提取的器皿什么的玻璃的180度烘烤，枪头离心管各种试剂之类的用新开口的，把枪头盒什么的用酒精好好擦擦，即使国产也可以凑合用，用DEPC水泡过灭菌当然更好~~
提取过程中保证环境的清洁，少说话，最好戴个口罩吧，手套建议用橡胶手套，一次性的用着太不方便，反而容易污染~离心机最好放在自己实验的台子上，接触离心管的部位大概擦擦，也为了预防吧~
在离心管开关口的过程小心，避免手接触到管口，防止有杂物落入~~自己试着提几次，熟就好了，没有想象的那么困难，如果不是完全定量的部分讲解也是可以接受的~~
我没怎么用试剂盒，RNA提取，DNA消化、反转都是自己弄的，没用试剂盒，你可以根据自己需要对比一下~
希望这些对你有用
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-03-03 14:23:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290求调剂 +4 ^O^乜 2026-03-19 4/200 2026-03-20 11:51 by 学员8dgXkO
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-03-18 5/250 2026-03-20 09:00 by ZHANG0tao
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +8 步川酷紫123 2026-03-13 8/400 2026-03-20 08:47 by xingguangj
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by ！本暗一次！
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀～
[考研] 一志愿西南交大，求调剂 +4 材化逐梦人 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:22 by 007_lilei
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 280求调剂 +6 咕噜晓晓 2026-03-18 7/350 2026-03-18 11:25 by 无际的草原
[考研] 303求调剂 +4 睿08 2026-03-17 6/300 2026-03-18 11:01 by Iveryant
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭