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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】细菌总RNA的提取和RT-PCR
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tutufei

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】细菌总RNA的提取和RT-PCR

1.第一次做细菌总RNA的提取，很担心RNA会降解，请问需要注意哪些？
（菌体培养阶段所用的器皿，枪头需要DEPC水浸泡吗，还是从菌体离心开始提取RNA时才要求所有东西要RNase-free？）
2.我只要检测RNA的转录情况，只需要反转录成CDNA的第一链，帮忙推荐下RT-PCR试剂盒，哪个公司的好用？

[ Last edited by tutufei on 2011-3-2 at 18:20 ]
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1楼 2011-03-02 18:09:18
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fzfangtao

木虫 (正式写手)
另外，我们实验室反转是不用什么试剂盒的，呵呵，直接用酶等
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7楼2011-03-04 19:36:50
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-03-02 18:48:44
翱宇(金币+1): 鼓励交流！ 2011-03-05 14:58:55
tutufei(金币+3): 谢谢 2011-03-12 11:37:13
引用回帖:
Originally posted by tutufei at 2011-03-02 18:09:18:
1.第一次做细菌总RNA的提取，很担心RNA会降解，请问需要注意哪些？
（菌体培养阶段所用的器皿，枪头需要DEPC水浸泡吗，还是从菌体离心开始提取RNA时才要求所有东西要RNase-free？）
2.我只要检测RNA的转录情况， ...

注意事项比较多，从提取阶段开始，培养阶段正常就行。所有枪头，离心管都要用DEPC水浸泡，灭菌。如果要做电泳，电泳槽也用DEPC水浸泡一下更好。

如果只要第一链，那用两步法就行，我当时用的是PROMIGA公司的逆转录酶，而且没用试剂盒，DIY。效果不错。
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2楼2011-03-02 18:23:25
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与~~~ 2011-03-02 21:30:35
菌体培养阶段所用的器皿不用，枪头等接触rna的器皿都需要处理，fermentas，宝生物的，都不错
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3楼2011-03-02 21:23:00
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tdong06

木虫 (正式写手)
我也要做，有没有高手提供多点细节啊？注意事项等等。越详细越好！
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4楼2011-03-02 23:11:23
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