| 查看: 1972 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】质粒双酶切连接问题 已有7人参与
|
|||
|
有一个关于质粒双酶切的问题一直没弄明白。 双酶切连接转化完以后，一个菌里面会不会有许多不同大小的质粒存在。有的是酶切连接正确的，有的是质粒自身连接的，还有的是没有连接上的。 如果是这样的话，那么提质粒其实是把这些不同大小的质粒都提取出来了么？ |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有79人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 酶切问题
已经有11人回复
- 双酶切问题
已经有15人回复
- 将质粒上紧挨着的两个酶切位点进行双酶切后连接外源基因片段，是不是不好连接？
已经有13人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 求助 双酶切验证阳性克隆的问题
已经有12人回复
- 【问题反馈】质粒双酶切切下120bp每次都看不到？
已经有21人回复
- 【求助/交流】质粒pPICZA酶切问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】双酶切质粒后，目的条带浅且前方有模糊亮带
已经有12人回复
panda73
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 3
- 应助: 80 (初中生)
- 金币: 1201.3
- 散金: 44
- 红花: 2
- 帖子: 191
- 在线: 42.5小时
- 虫号: 985964
- 注册: 2010-03-30
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵 |
其实，这是一个很好的问题。 连接时，如楼主所说，会出现各种连接产物：包括载体A:单载体分子的自连产物，B:两个载体分子的自连产物，C:目的基因与载体正确连接的产物，D:两个目的基因的自连产物等等 转化时，这些不同的连接产物，完全有可能进入同一个感受态细胞。但是这些连接产物中，只有两种是可以复制的：那就是A和C 那为什么在通常情况下，没有出现一个单克隆中出现两种不同的质粒呢？ 事实上，这就涉及到质粒的一个特性：质粒的不相容性。一般认为，如果两种质粒的复制原点相同，那么这两个质粒不可能共存于同一个大肠杆菌细胞中（即在分裂时，一般为随机丢失一种质粒，最终表现为只有一种质粒存在于一个单克隆中）。质粒不相容性的原因有些不同的假说，貌似到现在还不是特别清楚。 但是质粒的不相容性也就保证了单克隆中只有一种质粒，虽然我们不知道为什么。这也是能够进行分子克隆的一个基本原理。 但现在越来越多的事实表明，质粒的不相容性并不是那么严格，这个现象在文库构建时表现的比较明显，在单克隆测序时，经常会发现出现重峰现象，这通常就是因为单克隆繁殖起来的群体中含有两种质粒（插入序列不同的克隆） |
8楼2012-03-27 21:50:32
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
我爱打老虎
- MolEPI: 14
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113929
- 散金: 1526
- 红花: 224
- 沙发: 1
- 帖子: 28920
- 在线: 3665.4小时
- 虫号: 464575
- 注册: 2007-11-21
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
，罚你看一遍 吴乃虎 的基因工程原理 
2楼2011-02-28 14:14:44
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16382.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3648
- 在线: 288.2小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
3楼2011-02-28 14:15:20
weishengsu5
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2526
- 红花: 1
- 帖子: 469
- 在线: 374.2小时
- 虫号: 1016558
- 注册: 2010-05-12
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
4楼2011-02-28 15:33:41