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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒双酶切连接问题
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒双酶切连接问题 已有7人参与

有一个关于质粒双酶切的问题一直没弄明白。
双酶切连接转化完以后，一个菌里面会不会有许多不同大小的质粒存在。有的是酶切连接正确的，有的是质粒自身连接的，还有的是没有连接上的。
如果是这样的话，那么提质粒其实是把这些不同大小的质粒都提取出来了么？
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panda73

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1楼 2011-02-28 14:10:31
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有点晕了
貌似一次只能转进去一个质粒。
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Thank-you，so-blue.
5楼2011-02-28 21:39:51
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
，罚你看一遍 吴乃虎 的基因工程原理
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-02-28 14:14:44
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 鼓励下 2011-02-28 17:02:44
是啊，你可以把提取出来的质粒酶切验证一样就可以了，要么进行pcr验证也行！
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-02-28 14:15:20
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weishengsu5

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-02-28 17:02:06
lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-02-28 17:02:28
引用回帖:
Originally posted by liuwei78 at 2011-02-28 14:10:31:
有一个关于质粒双酶切的问题一直没弄明白。
双酶切连接转化完以后，一个菌里面会不会有许多不同大小的质粒存在。有的是酶切连接正确的，有的是质粒自身连接的，还有的是没有连接上的。
如果是这样的话，那么提质 ...

连接以后肯定会存在这种情况，但是我们在进行连接的时候一般都把抗青霉素的基因作为筛选标记，所以就不会出现没有连接上的情况了，至于自身连接的问题，可以把酶切后的片段用碱性磷酸酶处理去磷酸化，这样就不会出现自身连接的情况了
赞一下(3人) 回复此楼
4楼2011-02-28 15:33:41
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