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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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heiguzi1988

新虫 (初入文坛)


[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选问题

我用的是DH5α甘油菌和PUC19做蓝白斑筛选,做了几次实验,(培养基是LB固体培养基,内含氨苄抗生素,等凝固之后在表面涂上X-gal和IPTG,涂好后且在一天内使用,不会久存),发现克隆细胞没有蓝斑只有白班,我开始以为是连接效率很高以致无自连质粒菌,但是后来拿空质粒转化这个甘油菌,居然也只有白斑没有蓝斑。放在4度冰箱显色几个小时没有变化。这就很奇怪了,按道理来说应该全部是蓝斑才是。请问到底哪里出了问题呢?是实验设计不对么??

最后补充一点,那个试剂应该是没有问题的。我新买的,尤其是质粒从不同公司买了两次新的。

[ Last edited by rainwander on 2011-2-27 at 17:20 ]
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)



dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-28 10:42:07
amp容易失效。。 比如温度稍微高一点。
3楼2011-02-27 20:12:45
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zhang_teng

银虫 (小有名气)



dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-28 10:41:58
Amp或者X-gal是不是失效了?Amp多大浓度?建议再做一遍
2楼2011-02-27 18:52:28
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翱宇

禁虫 (正式写手)


★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与,我做转化时,也是这么做的~~呵呵 2011-02-27 21:04:08
每一次我做类似实验是,加800ul液体LB活化后,37度摇50分钟,4000rpm离心三分钟,将液体倒出去,留100ul,以移液器吹匀沉淀,此时加入液体X-gal(选择promega的液体试剂),加入几ulIPTG,再以移液器吹匀涂板,就好了,不行的话可以放于四度一会!
4楼2011-02-27 21:01:59
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