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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蓝白斑筛选问题
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heiguzi1988

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选问题

我用的是DH5α甘油菌和PUC19做蓝白斑筛选，做了几次实验，（培养基是LB固体培养基，内含氨苄抗生素，等凝固之后在表面涂上X-gal和IPTG，涂好后且在一天内使用，不会久存），发现克隆细胞没有蓝斑只有白班，我开始以为是连接效率很高以致无自连质粒菌，但是后来拿空质粒转化这个甘油菌，居然也只有白斑没有蓝斑。放在4度冰箱显色几个小时没有变化。这就很奇怪了，按道理来说应该全部是蓝斑才是。请问到底哪里出了问题呢？是实验设计不对么？？

最后补充一点，那个试剂应该是没有问题的。我新买的，尤其是质粒从不同公司买了两次新的。

[ Last edited by rainwander on 2011-2-27 at 17:20 ]
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1楼 2011-02-27 17:09:28
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-28 10:42:07
amp容易失效。。 比如温度稍微高一点。
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3楼2011-02-27 20:12:45
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zhang_teng

银虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-28 10:41:58
Amp或者X-gal是不是失效了？Amp多大浓度？建议再做一遍
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2楼2011-02-27 18:52:28
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翱宇

禁虫 (正式写手)
★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与，我做转化时，也是这么做的~~呵呵 2011-02-27 21:04:08
每一次我做类似实验是，加800ul液体LB活化后，37度摇50分钟，4000rpm离心三分钟，将液体倒出去，留100ul，以移液器吹匀沉淀，此时加入液体X-gal（选择promega的液体试剂），加入几ulIPTG，再以移液器吹匀涂板，就好了，不行的话可以放于四度一会！
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4楼2011-02-27 21:01:59
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