应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蓝白斑筛选问题
41/1返回列表
查看: 1491  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

heiguzi1988

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选问题

我用的是DH5α甘油菌和PUC19做蓝白斑筛选，做了几次实验，（培养基是LB固体培养基，内含氨苄抗生素，等凝固之后在表面涂上X-gal和IPTG，涂好后且在一天内使用，不会久存），发现克隆细胞没有蓝斑只有白班，我开始以为是连接效率很高以致无自连质粒菌，但是后来拿空质粒转化这个甘油菌，居然也只有白斑没有蓝斑。放在4度冰箱显色几个小时没有变化。这就很奇怪了，按道理来说应该全部是蓝斑才是。请问到底哪里出了问题呢？是实验设计不对么？？

最后补充一点，那个试剂应该是没有问题的。我新买的，尤其是质粒从不同公司买了两次新的。

[ Last edited by rainwander on 2011-2-27 at 17:20 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-02-27 17:09:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang_teng

银虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-28 10:41:58
Amp或者X-gal是不是失效了？Amp多大浓度？建议再做一遍
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-02-27 18:52:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-28 10:42:07
amp容易失效。。 比如温度稍微高一点。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-02-27 20:12:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)
★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与，我做转化时，也是这么做的~~呵呵 2011-02-27 21:04:08
每一次我做类似实验是，加800ul液体LB活化后，37度摇50分钟，4000rpm离心三分钟，将液体倒出去，留100ul，以移液器吹匀沉淀，此时加入液体X-gal（选择promega的液体试剂），加入几ulIPTG，再以移液器吹匀涂板，就好了，不行的话可以放于四度一会！
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-02-27 21:01:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 heiguzi1988 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭