应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】土壤DNA提取及PCR
211/3返回列表123下一页
查看: 2551  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】土壤DNA提取及PCR 已有11人参与

大家好！我们实验室最近在做土壤DNA提取及PCR等相关实验。我们利用手提方法提取土壤DNA，然后利用Axygen的胶回收试剂盒回收，最后利用ITS1F/ITS4 进行PCR。电泳回收后的260/230及260/280都在1.8左右，但是扩增不出来，而阳性对照能扩增出来，不知是何原因？期待各位高人的指点。另外，大家也可推荐下你们用的土壤DNA提取及纯化方法。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-02-18 21:49:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
翱宇(金币+1): 谢谢交流 2011-02-18 22:55:57

我总是习惯推荐 周集中的 CTAB法，经典，重复性高，适用于几乎所有土壤沉积物及污泥样品。
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-02-18 22:21:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)
lstt09nk: 最好引用楼上的帖子，这样他才容易看的到，要不然他不回到这个帖子是看不到你说的话的~~ 2011-03-18 15:36:19

谢谢brightfuture01 虫友！我也是参考周集中（1996）的方法，但是提取后颜色很深，纯化很难。不知你是用哪种纯化方法？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-02-18 22:46:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunlblove

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我提取的样品是黄褐色的 PCR也不能P出东西，是有PCR抑制剂，但是不知道DNA如何除去抑制剂呢？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-03-11 10:52:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1): 感谢交流 2011-03-18 15:36:39
可能是dna含量太低，可以试试以第一次的扩增产物为模板再扩几次
赞一下(2人) 回复此楼
风雪夜归人
5楼2011-03-11 11:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)
Axygen的胶回收试剂盒只能回收15kb的片段，我提取出来片段大约23kb，可能是试剂盒的回收片段小了点，不知道换大片段胶回收试剂盒效果会怎样？我改进提取方法后，在PCR体系中加BSA，模板稀释100/1000/10000倍都能扩增出条带，但条带比较弱。
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-11 14:37:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabing0324

金虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个土壤DNA，唉！！！我也在愁
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-03-12 22:05:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

精精

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by qyunpeng at 2011-02-18 21:49:50:
大家好！我们实验室最近在做土壤DNA提取及PCR等相关实验。我们利用手提方法提取土壤DNA，然后利用Axygen的胶回收试剂盒回收，最后利用ITS1F/ITS4 进行PCR。电泳回收后的260/230及260/280都在1.8左右，但是扩增不出 ...

用试剂盒提会好很多，手提的话减少DNA用量把
赞一下(1人) 回复此楼
少才微善
8楼2011-03-17 16:51:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)
试剂盒忒贵了，样品太多了，用不起啊。大家有没有性价比比较高的土壤试剂盒啊？
赞一下 回复此楼
9楼2011-03-18 08:50:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen4

新虫 (初入文坛)

前处理

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+1): 鼓励交流~~~ 2011-03-26 17:41:37
引用回帖:
Originally posted by qyunpeng at 2011-02-18 21:49:50:
大家好！我们实验室最近在做土壤DNA提取及PCR等相关实验。我们利用手提方法提取土壤DNA，然后利用Axygen的胶回收试剂盒回收，最后利用ITS1F/ITS4 进行PCR。电泳回收后的260/230及260/280都在1.8左右，但是扩增不出 ...

对土壤做前处理动作，TENP洗涤离心，最后用PBS处理，然后再提取DNA即可。
赞一下(2人) 回复此楼
棒棒
10楼2011-03-18 13:56:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qyunpeng 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 341求调剂 +5 捣蛋猪猪 2026-03-11 5/250 2026-03-17 06:56 by Muziwl
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 4/200 2026-03-16 20:13 by Wangjingyue
[考研] 材料专硕306英一数二 +4 z1z2z3879 2026-03-16 6/300 2026-03-16 19:38 by z1z2z3879
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 26考研求调剂 +5 丶宏Sir 2026-03-13 5/250 2026-03-13 13:05 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 一志愿：武汉理工，材料工程，英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭