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qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】土壤DNA提取及PCR 已有11人参与

大家好!我们实验室最近在做土壤DNA提取及PCR等相关实验。我们利用手提方法提取土壤DNA,然后利用Axygen的胶回收试剂盒回收,最后利用ITS1F/ITS4 进行PCR。电泳回收后的260/230及260/280都在1.8左右,但是扩增不出来,而阳性对照能扩增出来,不知是何原因?期待各位高人的指点。另外,大家也可推荐下你们用的土壤DNA提取及纯化方法。
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qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)

Axygen的胶回收试剂盒只能回收15kb的片段,我提取出来片段大约23kb,可能是试剂盒的回收片段小了点,不知道换大片段胶回收试剂盒效果会怎样?我改进提取方法后,在PCR体系中加BSA,模板稀释100/1000/10000倍都能扩增出条带,但条带比较弱。
6楼2011-03-11 14:37:01
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
翱宇(金币+1): 谢谢交流 2011-02-18 22:55:57

我总是习惯推荐 周集中的 CTAB法,经典,重复性高,适用于几乎所有土壤沉积物及污泥样品。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-02-18 22:21:59
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qyunpeng

铁杆木虫 (小有名气)

lstt09nk: 最好引用楼上的帖子,这样他才容易看的到,要不然他不回到这个帖子是看不到你说的话的~~ 2011-03-18 15:36:19

谢谢brightfuture01 虫友!我也是参考周集中(1996)的方法,但是提取后颜色很深,纯化很难。不知你是用哪种纯化方法?
3楼2011-02-18 22:46:56
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sunlblove

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我提取的样品是黄褐色的 PCR也不能P出东西,是有PCR抑制剂,但是不知道DNA如何除去抑制剂呢?
4楼2011-03-11 10:52:46
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