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shihongling

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】RNA峰度不够! 已有7人参与

提取目的基因RNA后做RT-PCR,总是P不出来,用DNA做就可以P出来,是不是RNA峰度不够啊?怎么提高RNA峰度呢?我试过添加诱导物了,还是做不出来!请教大家了!
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cxt86

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): good 2011-02-19 20:59:46

我觉得先用内参基因做个阳性PCR对照吧,看看是不是模板的问题,用oligo dT对一些距离PolyA比较近的基因有好的反转录效果,可以同时加入oligo dT和random primer进行反转录
如果内参条带正常的话,就把循环数增加到一个苛刻的情况,比如40~50个循环,如果能够获得目的条带或者在目的条带的位置有弥散,可能就是丰度不高的原因了
如果没有,也有可能是就是你的实验材料不表达你的基因,或者表达很低
9楼2011-02-19 20:27:11
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