24小时热门版块排行榜    

查看: 1165  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wuw579

铁杆木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】PCR问题

我欲设计两种PCR:模板 引物 试剂 程序都完全一样
1、40个循环
2、先20个循环,取出1微升为模板再20个循环
谁能告诉我产物量有什么区别
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3): 热心的淀粉酶 2011-02-21 22:13:49

产物量有无变化都有可能,因为有些因素都已经改变了。40个连续循环能得到的产物,改为两段PCR后减少甚至完全得不到,又或者会变得更多。

1、因为在40个PCR后还有个总延伸阶段,如果聚合酶活力下降效率降低,或者聚合碱基的速度降低,那么聚合成的单链将会在3撇端截短,此阶段可以以两条单链各为模板将各自3撇端补全,消除部分单链而成完整双链。如果20个循环后取出产物作为模板,那么就要用第一个循环来补全模板,少了一个有效的循环,导致最终产物减少二分之一。

2、分段PCR补充了聚合酶和dNTP,使得产物变多,不过一般来说dNTP都会够的,一般不会少,主要可能是聚合酶钝化,可能需要补充。

3、模板的量变化,这会导致不确定性。明明是摸索好的东西,改变了就难说了,可能更合适或者更不合适,所以导致产物变多还是变少都难说。

所以说难说啊,你就试一次吧,实验就是要摸索的,谁都知道的结果就不好玩了。
4楼2011-02-21 21:37:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

bilangyiqi

铁虫 (正式写手)


沙发
希望楼下的人能帮助到您
2楼2011-02-17 16:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-02-17 20:01:09
wuw579(金币+2): 是有点问题 呵呵 谢谢啦 2011-02-17 22:01:06
这种多变量动力学模型的问题,我想论坛上没有人能回答……专门弄数学模型的活性知道……
3楼2011-02-17 16:04:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乌和尚

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
998653楼: Originally posted by bilangyiqi at 2011-02-17 16:04:42
沙发
希望楼下的人能帮助到您

希望楼下的人能帮助到您
5楼2012-07-25 19:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +9 瞬息宇宙 2026-08-12 9/450 2026-08-13 10:12 by Vivilian
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
信息提示
请填处理意见