应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR问题
51/1返回列表
查看: 1014  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wuw579

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR问题

我欲设计两种PCR：模板 引物 试剂 程序都完全一样
1、40个循环
2、先20个循环，取出1微升为模板再20个循环
谁能告诉我产物量有什么区别
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-02-17 15:42:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bilangyiqi

铁虫 (正式写手)
沙发
希望楼下的人能帮助到您
赞一下 回复此楼
2楼2011-02-17 16:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-02-17 20:01:09
wuw579(金币+2): 是有点问题 呵呵 谢谢啦 2011-02-17 22:01:06
这种多变量动力学模型的问题，我想论坛上没有人能回答……专门弄数学模型的活性知道……
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-02-17 16:04:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3): 热心的淀粉酶 2011-02-21 22:13:49

产物量有无变化都有可能，因为有些因素都已经改变了。40个连续循环能得到的产物，改为两段PCR后减少甚至完全得不到，又或者会变得更多。

1、因为在40个PCR后还有个总延伸阶段，如果聚合酶活力下降效率降低，或者聚合碱基的速度降低，那么聚合成的单链将会在3撇端截短，此阶段可以以两条单链各为模板将各自3撇端补全，消除部分单链而成完整双链。如果20个循环后取出产物作为模板，那么就要用第一个循环来补全模板，少了一个有效的循环，导致最终产物减少二分之一。

2、分段PCR补充了聚合酶和dNTP，使得产物变多，不过一般来说dNTP都会够的，一般不会少，主要可能是聚合酶钝化，可能需要补充。

3、模板的量变化，这会导致不确定性。明明是摸索好的东西，改变了就难说了，可能更合适或者更不合适，所以导致产物变多还是变少都难说。

所以说难说啊，你就试一次吧，实验就是要摸索的，谁都知道的结果就不好玩了。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-02-21 21:37:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乌和尚

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
998653楼: Originally posted by bilangyiqi at 2011-02-17 16:04:42
沙发
希望楼下的人能帮助到您

希望楼下的人能帮助到您
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-25 19:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wuw579 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭