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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pMAL-p4x/TB1体系，蛋白未表达
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风辉e日

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】pMAL-p4x/TB1体系，蛋白未表达

构建目的蛋白突变体的pMAL-p4x表达载体，所用菌株为TB1，MBP与目的蛋白间加了Tev酶切位点，经Dot-Blot验证发现，野生型蛋白有表达而新构建的突变体蛋白未表达，求解原因及建议
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1楼 2011-01-27 09:57:07
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-27 16:49:36
可能是突变造成蛋白结构的剧变，结构不稳定或者对宿主有伤害，宿主不表达了。

突变是否造成了宿主密码子范围外的稀有密码子？可以换个宿主试试看。
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2楼2011-01-27 16:27:17
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翱宇

禁虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励分享自己成功的经验~~~ 2011-01-28 08:21:46
我所做的表达是用的PMAL-c2x，最开始也是没有表达，但是加入IPTG后，转移至18度摇菌，就表达了，楼主试试吧！
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3楼2011-01-27 23:30:56
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amilie030312

金虫 (正式写手)
现在是pMAL-p5x了吧
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4楼2011-01-28 14:52:28
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落明逐暗

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-26 18:47:53
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-01-27 23:30:56:
我所做的表达是用的PMAL-c2x，最开始也是没有表达，但是加入IPTG后，转移至18度摇菌，就表达了，楼主试试吧！

刚好请教一下，你表达的时候有MBP共表达吗？我用的是c4x，诱导后融合蛋白有表达，但单MBP的表达也很多。。。纯化后更明显。
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5楼2011-04-26 10:26:22
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翱宇

禁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 落明逐暗 at 2011-04-26 10:26:22:
刚好请教一下，你表达的时候有MBP共表达吗？我用的是c4x，诱导后融合蛋白有表达，但单MBP的表达也很多。。。纯化后更明显。

表达融合蛋白啊，是不是你的菌不存啊，按照逻辑只能表达出融合蛋白才对。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-04-26 11:40:16
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