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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】做realtime-PCR,退火温度很重要吗?

要做realtime-PCR,需不需要摸索最适退火温度? 望指点
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j2

木虫 (正式写手)



xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
做个梯度吧,没有非特异片段最重要
9楼2011-01-21 14:34:12
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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by love_st at 2011-01-21 10:43:52:
需要

为什么呀? 怎么摸索呢?是不是要先设个温度梯度做个半定量PCR
3楼2011-01-21 10:46:29
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xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
非常必要摸索条件
因为退火温度能够影响特异性以及PCR效率
4楼2011-01-21 11:09:25
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zhp1984816

铜虫 (初入文坛)



xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
我们实验室都没有摸索,一套程序做所有,但是有些特殊的引物,比如TM值特别的高的,还是会摸索一下提高退火温度看看,但是普通的引物我们一般都那么一套程序下来挺好的
5楼2011-01-21 12:49:23
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