应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】为什么测序和读码框都正确的酵母蛋白在大肠中不表达
21/1返回列表
查看: 1448  |  回复: 8
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xucan0901

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】为什么测序和读码框都正确的酵母蛋白在大肠中不表达

我的这个基因是酵母中的但是没有内含子，蛋白较大155kDa，
转入表达两种表达质粒了，有一种还侧过序l了。
     我做过好多条件了，温度从10°到37°，iptg从0.4到1.2mM ,时间从3h到20h都做过了，iptg诱导后跑全细胞电泳感觉根本没有表达。
    后来听说要加甘油试试，我感觉不靠谱，因为加甘油是为了增加目的蛋白的溶解性的，我的全细胞都没有，就根本没有必要考虑溶解性了。
    后来又听说稀有密码子问题，叫我换Rosetta（DE3）菌株，这个我还没来得及做过不知道值 不值得一试。

希望高手指教指教，真的搞奔溃了，同学做实验搞两下就出来了，我的怎么处处都是坎呐！拜谢了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-18 22:42:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2): 有可能吧 2011-01-19 09:39:51
xucan0901(金币+1): 2011-01-19 10:12:34
是不是蛋白太大了，先问问有没有表达过这么大的蛋白的先例。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-18 22:49:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xucan0901 的主题更新
21/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭