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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pcr反应目的条带很浅，引物二聚体很亮
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pxm0705

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】pcr反应目的条带很浅，引物二聚体很亮

请问一下各位高手，我PCR反应后目的条带
很浅,引物二聚体条带很亮,是什么原因?之前预做过几次都没有出现这样的问题,条件,引物.模板都没有变.谢谢!这是出现问题的图片(最下面的一条是60bp左右的引物二聚体)
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1楼 2011-01-16 22:14:27
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
pxm0705(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-01-18 15:35:55
大部分的有两条带，最后一组有三条带呀
可能引物还是有点特异性不是很强的问题吧，LZ可以Blast一下
非特异性条带可以适当提高一下Tm
引物二聚体可以等PCR仪升上去以后再开始反应
可以在反应管中加入适量的BSA，DMSO。。。可以减少非特异性反应
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11楼2011-01-17 09:42:58
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翱宇

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
pxm0705(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+2): good 2011-01-17 09:18:35
你的PCR条件是什么呢？（退火温度，PCR循环数，延伸时间）我感觉可以提高退火温度，可以做个温度梯度PCR，然后跑琼脂糖胶看结果。其实一般都有引物二聚体的，只要目标条带很亮就行，我怎么看你有两条带，究竟哪一条是你所需要的呢？
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2楼2011-01-16 22:23:38
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wangy0908

金虫 (正式写手)
★
pxm0705(金币+1):谢谢参与
我也遇到同样的问题。想问问如何优化反应条件的呢。引物是特异的，但是始终扩出来有多条带！
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3楼2011-01-17 05:47:10
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
pxm0705(金币+1):谢谢参与
dhd997(金币+1): 经验之谈？ 2011-01-17 09:18:54
提个建议，绝不是做广告。可以试试NEB公司的超保真酶Phusion,效果应该不错。
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5楼2011-01-17 08:31:01
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?磭Y壹笑4楼
2011-01-17 08:14   回复  
pxm0705(金币+1):谢谢参与
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