[交流] 【交流】HPLC交流交流，呵呵，有问题集中讨论嘛已有36人参与

1楼2011-01-05 21:25:08

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呵呵，有啥问题提出来，我尽力回答

4楼2011-01-06 09:54:52

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Originally posted by huahua5 at 2011-01-07 15:14:32:
问题多多。

我新买了氨基柱，用异丙醇（过滤、超声脱气），0.3ml/min，走了3.5小时，未接检测器。之后走流动相（乙腈：甲醇：水=90:10:1），好多杂质峰。我进了对照品，以前的柱子只有3·4个峰，现在这个柱子有 ...

你这样的情况，最好把这个柱子断开检测器，长时间小流速的冲洗异丙醇比较好，还有就是仔细看看说明书，氨基柱可以当反相使用，但是必须要用小流速的异丙醇冲洗长时间，如果是新的柱子，出厂之前会进几针测试样的，如果你有以前的柱子也可以试试，最好把图放上来看看，异丙醇是无水的么？氨基柱不能用含水太多的流动相，祝你试验成功！

7楼2011-01-07 19:23:02

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Originally posted by ice0718 at 2011-01-07 19:27:43:
我用制备液相分出来的物质，用分析型液相检测纯度，在2分多钟总是出现一个倒峰，是怎么回事？（制备得到的样品是70%甲醇+30%水）是否和样品里的水分有关？还是其他？

你进空白会有这个峰么？这个峰和水分应该没啥关系，2分钟没啥保留，考虑是溶剂峰

9楼2011-01-07 19:29:20

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★ ★
novus(金币+2): 很耐心的讲解，不愧是PhD兼DXY的老版主！欢迎常来药学版给新虫答疑解惑！ 2011-01-19 15:15:33

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Originally posted by huahua5 at 2011-01-10 17:13:52:

异丙醇因为粘度大，所以要小流速。我用0.1ml/min的流速走异丙醇，压力2.1MPa,走5个小时，应该可以吧？（柱子250*4.6mm，柱体积没算错的话应该是4ml多）。之后就可以直接走流动相了？还是需要走甲醇？

另 ...

氨基柱在含水量多的情况下是很不稳定的。也不宜在强酸的环境下使用。用的是缓冲液则先用水/乙腈清洗再用乙腈，.氨基住其本质属于正相柱，使用氨基柱除了采用正相系统作为流动相以外，一般还采用乙腈-水作为流动相，但是要求乙腈的含量不得低于80%，含水过多的流动相对氨基柱有损害，一般尽量不要用含水过多流动相。建议用小流速的异丙醇冲洗过夜试试。氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的，这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。NH2柱是在硅胶上键合一个5碳NH2;CN柱是在硅胶上键合一个5碳CN基;NH2.CN都为两相柱.
对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。反相条件下使用时，要特别注意控制PH值范围，PH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。所以，在使用后以及准备长时间放置该柱时，必要的清洗和将氨基柱保存于纯的有机溶剂中是很好的保养措施。
简单说起来，正相条件下使用的氨基柱你就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱你就参照C18的清洗方法。
平时在正相条件下使用：
首先用50倍柱体积的异丙醇清洗，因异丙醇粘度较大可适当放低流速；之后，用50倍的甲醇清洗；之后，用异丙醇过渡回到平常使用的正相流动相，即可。
平时在反相条件下使用：
缓冲盐应及时冲洗，以及不能直接用纯甲醇冲洗缓冲盐等，属常识就不作特别交待了。
用50倍纯甲醇冲洗；之后，用异丙醇过渡后，用二氯甲烷冲洗色谱柱；之后，再用异丙醇过渡回来到甲醇条件下。
这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等

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11楼2011-01-10 20:19:30

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Originally posted by xiaodu2007693 at 2011-01-13 09:29:39:
买了半年多的制备液相，之前很好用
目前的问题是流速不稳，压力也是上下波动，经确认是管路没有气泡
请问是泵单向阀脏了吗？还是垫磨损了？
解决方法有那些？

制备液相还是请工程师来瞧瞧，这个只是用过，没拆过，呵呵，这个比较贵

14楼2011-01-13 09:47:41

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Originally posted by wlsky at 2011-01-28 14:30:12:
请教，配制流动相是用纯化水还是蒸馏水，谢谢

用蒸馏水过滤一下，再超一下就可以用了，当然可以直接用MILQ的水了，呵呵，水要保持新鲜，当天去蒸馏水用

16楼2011-01-28 16:32:13

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Originally posted by 粉色玉米 at 2011-01-28 21:11:00:
学习了、、、

一起讨论讨论嘛，一起提高

18楼2011-01-28 21:26:11

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Originally posted by maliyuan at 2011-01-29 15:56:31:
液相说难也不难，说简单也不简单，关键是能做出符合要求的图谱来！现在药审中心对图谱的要求越来越高了，不能手动积分啦，而且品种核查还要查电子图谱，这样就不能再造假了！我们也只有老 ...

你写的字够大的啊，呵呵，本来就是该咋样就咋样

21楼2011-01-29 18:53:14

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Originally posted by meteord at 2011-01-30 10:11:39:
标记下随时过来学习啊
单位安捷伦岛津 WATERS 的都有，药学的东西真多啊
问下比方说这样的流动相：乙腈：水（0.1%醋酸）=1：99 是不是直接无机相就这么配然后再慢慢调过去？

先配好水相再和有机相混合吧，这个1：99的最好一次性多配一点，因为比例比较悬殊所以最后混在一起比较好

23楼2011-01-30 11:30:25