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【求助/交流】关于酶切连接转化的问题
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| 大家好，我最近在做酶切，连接，转化，载体是PET-30a大概5420bp 进行了双酶切，切胶纯化，目的片段是300bp双酶切切胶纯化，纯化后i跑了电泳，亮度跟marker差不多，连接时我是目的片段与载体各1ul，酶1ul，6ul体系，和25ul体系都做过，只是做转化时平板都没有长菌，最可能的原因就是没连上吧，还有连接时的目的片段与载体的摩尔比是3-10:1，我不知道这个该怎么算，换算成体积该怎么加，请做过酶切连接并转化的有经验的大侠指教，我将不胜感激。诸位新年快乐，心想事成。 |
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丫头7976(金币+2): 2011-01-02 08:56:41
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丫头7976(金币+2): 2011-01-02 08:56:41
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http://www.promega.com/tbs/9pim180/9pim180.pdf 看看这个里面的摩尔数怎么计算吧。没必要做25ul那么大的连接体系。 至于体积，那是和你的DNA浓度相关的。 你确定感受态、及酶切都不存在问题么？ |
2楼2011-01-01 17:30:25
3楼2011-01-01 17:31:01
天使托
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