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kinglong09

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】6Kb的DNA片段怎么扩增啊?

最近扩增一个约6kb的DNA片段,总扩不出来。我用的是Takara的LA Taq,产物经琼脂糖凝胶检测,一点都没有
请问,是怎么回事?
敬请各位虫友指点。
谢谢!
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)



kinglong09(金币+1):谢谢参与
6kbLA应该是可以的,我扩过7.5的,不过和材料的有关,我用的是植物DNA,扩长片段引物要长,退火温度要高一些,
9楼2010-12-30 21:13:56
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查看全部 48 个回答

kinglong09(金币+2):谢谢参与
LA Taq我扩过最长的有5 K +,6 K可能有点悬,但也不一定是酶的问题,也有可能是引物的问题,或者退火温度的问题。将PCR条件优化下试试看。
2楼2010-12-30 18:44:53
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jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)



kinglong09(金币+2):谢谢参与
6K有点长,再摸索下条件,设个温度梯度看看
3楼2010-12-30 18:48:48
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kinglong09(金币+1):谢谢参与
6k还好吧,呵呵,我都没有用LA taq ,都是用的Primer STAR,注意延伸时间的设置。
4楼2010-12-30 19:56:09
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