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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】6Kb的DNA片段怎么扩增啊？
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kinglong09

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】6Kb的DNA片段怎么扩增啊？

最近扩增一个约6kb的DNA片段，总扩不出来。我用的是Takara的LA Taq，产物经琼脂糖凝胶检测，一点都没有
请问，是怎么回事？
敬请各位虫友指点。
谢谢！
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1楼 2010-12-30 18:25:30
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
★
kinglong09(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by gonglab-5 at 2011-01-11 12:48:27:
la我从动物细胞基因组扩15kb没问题
关键是
第一：模板的质量要高，用好的试剂盒提取基因组
第二：引物的特异性要好，否则扩不出来，可以适当增加引物的长度，但是尽量不要超过40nt

gonglab?农大的？呵呵
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47楼2011-01-18 15:04:00
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
kinglong09(金币+2):谢谢参与
LA Taq我扩过最长的有5 K +,6 K可能有点悬，但也不一定是酶的问题，也有可能是引物的问题，或者退火温度的问题。将PCR条件优化下试试看。
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2楼2010-12-30 18:44:53
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jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)
★
kinglong09(金币+2):谢谢参与
6K有点长，再摸索下条件，设个温度梯度看看
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3楼2010-12-30 18:48:48
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
kinglong09(金币+1):谢谢参与
6k还好吧，呵呵，我都没有用LA taq ，都是用的Primer STAR，注意延伸时间的设置。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-12-30 19:56:09
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