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kinglong09

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】6Kb的DNA片段怎么扩增啊?

最近扩增一个约6kb的DNA片段,总扩不出来。我用的是Takara的LA Taq,产物经琼脂糖凝胶检测,一点都没有
请问,是怎么回事?
敬请各位虫友指点。
谢谢!
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gonglab-5

木虫 (小有名气)


★ ★
kinglong09(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-11 16:14:42
kinglong09(金币+2): 2011-01-11 20:12:28
la我从动物细胞基因组扩15kb没问题
关键是
第一:模板的质量要高,用好的试剂盒提取基因组
第二:引物的特异性要好,否则扩不出来,可以适当增加引物的长度,但是尽量不要超过40nt
38楼2011-01-11 12:48:27
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kinglong09(金币+2):谢谢参与
LA Taq我扩过最长的有5 K +,6 K可能有点悬,但也不一定是酶的问题,也有可能是引物的问题,或者退火温度的问题。将PCR条件优化下试试看。
2楼2010-12-30 18:44:53
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jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)



kinglong09(金币+2):谢谢参与
6K有点长,再摸索下条件,设个温度梯度看看
3楼2010-12-30 18:48:48
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kinglong09(金币+1):谢谢参与
6k还好吧,呵呵,我都没有用LA taq ,都是用的Primer STAR,注意延伸时间的设置。
4楼2010-12-30 19:56:09
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