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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】6Kb的DNA片段怎么扩增啊？
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kinglong09

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】6Kb的DNA片段怎么扩增啊？

最近扩增一个约6kb的DNA片段，总扩不出来。我用的是Takara的LA Taq，产物经琼脂糖凝胶检测，一点都没有
请问，是怎么回事？
敬请各位虫友指点。
谢谢！
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1楼 2010-12-30 18:25:30
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★
kinglong09(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-11 16:13:46
引用回帖:
Originally posted by kinglong09 at 2010-12-30 18:25:30:
最近扩增一个约6kb的DNA片段，总扩不出来。我用的是Takara的LA Taq，产物经琼脂糖凝胶检测，一点都没有
请问，是怎么回事？
敬请各位虫友指点。
谢谢！

用TakaRa的LA Taq扩增就行了，人家公司30多K的片段都做出来了呢！
我觉得关键要把握好扩增的条件，如6k的片段，退火55℃ 1min，延伸72℃ 5min试一下看看！
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25楼2011-01-02 19:20:21
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
kinglong09(金币+2):谢谢参与
LA Taq我扩过最长的有5 K +,6 K可能有点悬，但也不一定是酶的问题，也有可能是引物的问题，或者退火温度的问题。将PCR条件优化下试试看。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-12-30 18:44:53
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jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)
★
kinglong09(金币+2):谢谢参与
6K有点长，再摸索下条件，设个温度梯度看看
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3楼2010-12-30 18:48:48
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
kinglong09(金币+1):谢谢参与
6k还好吧，呵呵，我都没有用LA taq ，都是用的Primer STAR，注意延伸时间的设置。
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4楼2010-12-30 19:56:09
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