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kinglong09

木虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】6Kb的DNA片段怎么扩增啊?

最近扩增一个约6kb的DNA片段,总扩不出来。我用的是Takara的LA Taq,产物经琼脂糖凝胶检测,一点都没有
请问,是怎么回事?
敬请各位虫友指点。
谢谢!
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)


★ ★
kinglong09(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-11 16:13:46
引用回帖:
Originally posted by kinglong09 at 2010-12-30 18:25:30:
最近扩增一个约6kb的DNA片段,总扩不出来。我用的是Takara的LA Taq,产物经琼脂糖凝胶检测,一点都没有
请问,是怎么回事?
敬请各位虫友指点。
谢谢!

用TakaRa的LA Taq扩增就行了,人家公司30多K的片段都做出来了呢!
我觉得关键要把握好扩增的条件,如6k的片段,退火55℃ 1min,延伸72℃ 5min试一下看看!
25楼2011-01-02 19:20:21
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kinglong09(金币+2):谢谢参与
LA Taq我扩过最长的有5 K +,6 K可能有点悬,但也不一定是酶的问题,也有可能是引物的问题,或者退火温度的问题。将PCR条件优化下试试看。
2楼2010-12-30 18:44:53
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jiangzhiang

铁杆木虫 (正式写手)



kinglong09(金币+2):谢谢参与
6K有点长,再摸索下条件,设个温度梯度看看
3楼2010-12-30 18:48:48
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kinglong09(金币+1):谢谢参与
6k还好吧,呵呵,我都没有用LA taq ,都是用的Primer STAR,注意延伸时间的设置。
4楼2010-12-30 19:56:09
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