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vs570588

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】DNA提取到测序步骤

我实验室从提取DNA到测序大的步骤如下
1,提取污泥中微生物DNA,跑电泳。
2,用源DNA做PCR,跑电泳。
3,用PCR样品做DGGE,并切取条带,溶于灭菌水。
4,用溶于灭菌水的条带,再做PCR,跑电泳,
5,切取第4步中电泳条带,溶于灭菌水。
6,用DNA纯化试剂盒纯化第5部所得样品。并跑电泳检测。
7,用第6步样品进行克隆后,送去测序。
现在问题是,做到第6步,用纯化试剂盒纯化的样品跑电泳条带特别暗,
我想问下大家,我的总体步骤哪里有问题?谢谢指教。
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tdong06

木虫 (正式写手)



scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-12-27 23:27:38
纯化的过程中是有损失的,所以变淡是正常的。只要能长出正确的克隆就可以测序了。
2楼2010-12-27 23:02:13
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rioarsenal

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by vs570588 at 2010-12-27 22:41:38:
我实验室从提取DNA到测序大的步骤如下
1,提取污泥中微生物DNA,跑电泳。
2,用源DNA做PCR,跑电泳。
3,用PCR样品做DGGE,并切取条带,溶于灭菌水。
4,用溶于灭菌水的条带,再做PCR,跑电泳,
5,切取第4步 ...

楼主用什么试剂盒纯化的?国产的一般效率都很低
3楼2010-12-28 02:33:56
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vs570588

木虫 (正式写手)


我用生工的,不过也有宝生物的,我想知道我的这个大步骤对着吗?大家都大步骤都是怎样的?
4楼2010-12-28 23:01:37
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