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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA提取到测序步骤
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vs570588

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA提取到测序步骤

我实验室从提取DNA到测序大的步骤如下
1，提取污泥中微生物DNA，跑电泳。
2，用源DNA做PCR,跑电泳。
3，用PCR样品做DGGE，并切取条带，溶于灭菌水。
4，用溶于灭菌水的条带，再做PCR，跑电泳，
5，切取第4步中电泳条带，溶于灭菌水。
6，用DNA纯化试剂盒纯化第5部所得样品。并跑电泳检测。
7，用第6步样品进行克隆后，送去测序。
现在问题是，做到第6步，用纯化试剂盒纯化的样品跑电泳条带特别暗，
我想问下大家，我的总体步骤哪里有问题？谢谢指教。
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1楼2010-12-27 22:41:38
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tdong06

木虫 (正式写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-27 23:27:38
纯化的过程中是有损失的，所以变淡是正常的。只要能长出正确的克隆就可以测序了。
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2楼2010-12-27 23:02:13
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rioarsenal

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by vs570588 at 2010-12-27 22:41:38:
我实验室从提取DNA到测序大的步骤如下
1，提取污泥中微生物DNA，跑电泳。
2，用源DNA做PCR,跑电泳。
3，用PCR样品做DGGE，并切取条带，溶于灭菌水。
4，用溶于灭菌水的条带，再做PCR，跑电泳，
5，切取第4步 ...

楼主用什么试剂盒纯化的？国产的一般效率都很低
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3楼2010-12-28 02:33:56
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vs570588

木虫 (正式写手)
我用生工的，不过也有宝生物的，我想知道我的这个大步骤对着吗？大家都大步骤都是怎样的？
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4楼2010-12-28 23:01:37
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