应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA提取到测序步骤
41/1返回列表
查看: 1857  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

vs570588

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】DNA提取到测序步骤

我实验室从提取DNA到测序大的步骤如下
1，提取污泥中微生物DNA，跑电泳。
2，用源DNA做PCR,跑电泳。
3，用PCR样品做DGGE，并切取条带，溶于灭菌水。
4，用溶于灭菌水的条带，再做PCR，跑电泳，
5，切取第4步中电泳条带，溶于灭菌水。
6，用DNA纯化试剂盒纯化第5部所得样品。并跑电泳检测。
7，用第6步样品进行克隆后，送去测序。
现在问题是，做到第6步，用纯化试剂盒纯化的样品跑电泳条带特别暗，
我想问下大家，我的总体步骤哪里有问题？谢谢指教。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-27 22:41:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tdong06

木虫 (正式写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-12-27 23:27:38
纯化的过程中是有损失的，所以变淡是正常的。只要能长出正确的克隆就可以测序了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-12-27 23:02:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by vs570588 at 2010-12-27 22:41:38:
我实验室从提取DNA到测序大的步骤如下
1，提取污泥中微生物DNA，跑电泳。
2，用源DNA做PCR,跑电泳。
3，用PCR样品做DGGE，并切取条带，溶于灭菌水。
4，用溶于灭菌水的条带，再做PCR，跑电泳，
5，切取第4步 ...

楼主用什么试剂盒纯化的？国产的一般效率都很低
赞一下 回复此楼
3楼2010-12-28 02:33:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vs570588

木虫 (正式写手)
我用生工的，不过也有宝生物的，我想知道我的这个大步骤对着吗？大家都大步骤都是怎样的？
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-28 23:01:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员BmWXvC 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭