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[交流]
【求助/交流】小弟对启动子序列的确定有惑，望解惑。
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是不是有软件能预测分析启动子序列？ 我现在已经P出来了一段800bp的基因序列了，BLAST之后同源性还是很好的（94%），我最紧迫的任务是克隆这个基因的启动子片段（cDNA不是首要任务），有Genome Walking Kit，染色体步移几次，应该能搞到上游10kb吧，就可以把启动子区域囊括进去了，问题来了，怎么确定从哪到哪是启动子序列？ 听说有软件能预测分析启动子序列？真的有么？准确性如何？ [ Last edited by feiye2214 on 2010-12-26 at 22:51 ] |
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 分子生化实验经验积累 |
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首先就是想直接查找有没有人做过这条基因的启动子，在pubmed中输入genename+promoter，返回15条记录; 接着看看有没有数据库可以直接给出启动子序列的，很幸运竟然发现一个极好的启动子搜索讲义网站，如下，http://inn.org.il/workshops/bgu/promoterworkshop.html 其中给出了查找启动子的一般步骤，并且列出了所要用到的工具，兴奋！ 第一步就是要找到基因确定基因所在基因组区域，其中列出很多网站，不过偶还是习惯genbank，在gene栏中search某个基因，不要搞错基因种属！进入后即可看到该基因的详细条目，别眼花，就点击右侧link栏的Map viewer链接，进入即可看到该基因在染色体上的形象定位，鼠标悬停在基因的起始位点时，即可在浏览器下方的状态栏中显示该位点在染色体上的明确定位，比如110997788，结合给出的基因跨度，比如110778899-117708899，即可大概确定该启动子在基因组中的大概定位，即 110778899-110997788； 第二步搞清楚基因组状态，我没搞太清楚，不过其中给的一个链接来查出启动子所在克隆（查出克隆号可以购买）http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/guide/mouse/ 该链接中的clonefinder工具可以做到，只要提交你要查找的基因officialname就可以返回一个clonelist； 第三步搜索启动子，其中可以用启动子数据库和启动子预测软件，当然如果启动子数据库中有最好，但很失望给出的数据库均不能查到！只好用启动子预测软件，使用了几个在线预测工具后觉得下面这个速度贼快，推荐http://www.cbs.dtu.dk/services/Promoter/ 我把该基因的dna序列submit之后返回了很多个PolII识别位点，到底哪个是呢？我个人理解启动子应该是翻译起始位点附近，所以在这个dna序列中定位翻译起始位点即可找到最近的Highly likely prediction，那么怎么定位呢？利用blast2这个利器，只要把dna和mrna序列粘贴进去提交就ok，正好在翻译起始位点上游几百bp有个识别位点，ok！启动子序列就是翻译起始位点上游大概1kb长度的序列了！ 当然，查找过程还有很多地方值得探讨，so请大家指正！ http://bip.weizmann.ac.il/toolbo ... ters.html#databases http://www.fruitfly.org/seq_tools/promoter.html http://sdmc.lit.org.sg/promoter/CGrich1_0/CGRICH.htm http://www.gene-regulation.com/pub/programs.html#pmatch http://ihome.cuhk.edu.hk/~b400559/arraysoft_pathway.html#Promoter http://www.dna.affrc.go.jp/PLACE/signalup.html http://intra.psb.ugent.be:8080/PlantCARE/ http://www.cbs.dtu.dk/services/Promoter/ http://bimas.dcrt.nih.gov/molbio/proscan/ http://thr.cit.nih.gov/molbio/signal/ 我也是初学哈，希望共同进步！ |
15楼2011-01-09 21:35:28
2楼2010-12-26 22:52:18
3楼2010-12-27 08:46:04
4楼2010-12-27 09:00:19
5楼2010-12-27 09:22:48
6楼2010-12-27 10:04:05
feiye2214(金币+30): 2010-12-27 20:21:55
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你先把完整的CDNA区域拿到，然后，可以通过试剂盒取得5K以上区域的启动子区域，能获得这么长基本上就差不多了，然后通过软件分析，就可以知道那是启动子区域，那是UTR区域，给你两个网站，对分析启动子有用的：http://www.dna.affrc.go.jp/PLACE/signalscan.html http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/ |
7楼2010-12-27 10:04:11
高手，谢谢你8楼2010-12-27 10:46:59
9楼2010-12-27 20:22:45
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