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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量PCRTm值代表啥意思？
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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】荧光定量PCRTm值代表啥意思？

荧光定量PCRTm值代表啥意思？为什么要大于85度才最好呢？请高手指导

再就是溶解曲线前面有小小的峰，那是咋回事？不同模板量小峰不一样，浓度最低的，几乎看不清了
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1楼 2010-12-21 00:00:54
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yanliusu

新虫 (小有名气)
溶解曲线只有单一峰值就是你的特异性条带，前面有个小峰值是非特异性的或者引物二聚体。有小峰的结果是不可靠的，因为SYBR染料能够与所有双链DNA结合，发出荧光，所以你可以增加模板浓度、减少引物量、提高退火温度，直到只有一个单峰了，结果就可以用了。
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11楼2010-12-30 14:48:00
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pidou213

木虫 (正式写手)
为什么没有人回复呢？期待高人啊
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2楼2010-12-26 20:35:51
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-27 08:42:50
Tm值和溶解曲线是为了检测PCR反应特异性的，主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增，也可能是引物二聚体，可以降低引物浓度试试
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3楼2010-12-26 21:45:21
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xiaoyu1014126 at 2010-12-26 21:45:21:
Tm值和溶解曲线是为了检测PCR反应特异性的，主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增，也可能是引物二聚体，可以降低引物浓度试试

Tm值多大才好呢？还是没有限制嗯？
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4楼2010-12-26 23:55:13
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