应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量PCRTm值代表啥意思？
131/1返回列表
查看: 7733  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】荧光定量PCRTm值代表啥意思？

荧光定量PCRTm值代表啥意思？为什么要大于85度才最好呢？请高手指导

再就是溶解曲线前面有小小的峰，那是咋回事？不同模板量小峰不一样，浓度最低的，几乎看不清了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2010-12-21 00:00:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
为什么没有人回复呢？期待高人啊
赞一下 回复此楼
2楼2010-12-26 20:35:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-27 08:42:50
Tm值和溶解曲线是为了检测PCR反应特异性的，主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增，也可能是引物二聚体，可以降低引物浓度试试
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-12-26 21:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xiaoyu1014126 at 2010-12-26 21:45:21:
Tm值和溶解曲线是为了检测PCR反应特异性的，主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增，也可能是引物二聚体，可以降低引物浓度试试

Tm值多大才好呢？还是没有限制嗯？
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-26 23:55:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
★
pidou213(金币+1):谢谢哦 2010-12-28 01:11:06
dhd997(金币+1):鼓励交流 2010-12-28 09:07:34
只是说在85左右是最好的。最重要的是你检查一下你的pcr产物是不是特异的吧，如果是特异的，以及是你的目的片段，这个值就不是那么重要了的！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2010-12-27 06:56:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

poog502

木虫 (正式写手)
我的Tm 80左右，单一主峰.
赞一下 回复此楼
6楼2010-12-27 08:01:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-12-27 06:56:30:
只是说在85左右是最好的。最重要的是你检查一下你的pcr产物是不是特异的吧，如果是特异的，以及是你的目的片段，这个值就不是那么重要了的！

在峰前面有一个很小很小的突起，可以接受吗？结果是被允许的吗、电泳的时候没检测不到非特异性条带
赞一下 回复此楼
7楼2010-12-28 01:12:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
pidou213(金币+1):基准线是什么？很小很小的凸起难道不就是达到基准线了吗？ 2010-12-28 17:48:55
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2010-12-28 01:12:26:



在峰前面有一个很小很小的突起，可以接受吗？结果是被允许的吗、电泳的时候没检测不到非特异性条带

如果是个别的引物有这种现象是可以的，但是如果全部引物都有的话，就不是很好。理论上是这种单峰没有达到基准线就可以的。所以你说的很小很小的突起，应该是可以接受的！
赞一下 回复此楼
8楼2010-12-28 06:44:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-12-28 06:44:03:

如果是个别的引物有这种现象是可以的，但是如果全部引物都有的话，就不是很好。理论上是这种单峰没有达到基准线就可以的。所以你说的很小很小的突起，应该是可以接受的！

基准线是指什么？阈值？很小很小的凸起难道不就是达到基准线了吗？
赞一下 回复此楼
9楼2010-12-28 17:49:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangy0908

金虫 (正式写手)
pidou213(金币+1):谢谢啦，辛苦啊 2010-12-30 18:18:33
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2010-12-28 17:49:16:



基准线是指什么？阈值？很小很小的凸起难道不就是达到基准线了吗？

在PCR跑完，生成溶解曲线的时候，同样也有一条直线代表基准线的啊。如果突起没有超过那条线，就可以了！Bio-Rad的CFX分析系统肯定有这条线的！看你用的什么分析仪器的！
赞一下 回复此楼
10楼2010-12-30 12:25:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanliusu

新虫 (小有名气)
溶解曲线只有单一峰值就是你的特异性条带，前面有个小峰值是非特异性的或者引物二聚体。有小峰的结果是不可靠的，因为SYBR染料能够与所有双链DNA结合，发出荧光，所以你可以增加模板浓度、减少引物量、提高退火温度，直到只有一个单峰了，结果就可以用了。
赞一下 回复此楼
11楼2010-12-30 14:48:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-12-30 12:25:34:

在PCR跑完，生成溶解曲线的时候，同样也有一条直线代表基准线的啊。如果突起没有超过那条线，就可以了！Bio-Rad的CFX分析系统肯定有这条线的！看你用的什么分析仪器的！

我们用的是ABI，貌似没有你说的那条线呢
赞一下 回复此楼
12楼2010-12-30 18:18:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yanliusu at 2010-12-30 14:48:00:
溶解曲线只有单一峰值就是你的特异性条带，前面有个小峰值是非特异性的或者引物二聚体。有小峰的结果是不可靠的，因为SYBR染料能够与所有双链DNA结合，发出荧光，所以你可以增加模板浓度、减少引物量、提高退火温 ...

问题是所谓的小峰真的很小很小，我等会传张图片让大家看看好了
赞一下 回复此楼
13楼2010-12-30 18:19:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 pidou213 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +19 羊腰板 2026-08-21 22/1100 2026-08-25 10:38 by popular289
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭