[交流] 【求助/交流】荧光定量PCRTm值代表啥意思？

Originally posted by xiaoyu1014126 at 2010-12-26 21:45:21:
Tm值和溶解曲线是为了检测PCR反应特异性的，主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增，也可能是引物二聚体，可以降低引物浓度试试

Originally posted by wangy0908 at 2010-12-27 06:56:30:
只是说在85左右是最好的。最重要的是你检查一下你的pcr产物是不是特异的吧，如果是特异的，以及是你的目的片段，这个值就不是那么重要了的！

Originally posted by pidou213 at 2010-12-28 01:12:26:



在峰前面有一个很小很小的突起，可以接受吗？结果是被允许的吗、电泳的时候没检测不到非特异性条带

Originally posted by wangy0908 at 2010-12-28 06:44:03:

如果是个别的引物有这种现象是可以的，但是如果全部引物都有的话，就不是很好。理论上是这种单峰没有达到基准线就可以的。所以你说的很小很小的突起，应该是可以接受的！

Originally posted by pidou213 at 2010-12-28 17:49:16:



基准线是指什么？阈值？很小很小的凸起难道不就是达到基准线了吗？

Originally posted by wangy0908 at 2010-12-30 12:25:34:

在PCR跑完，生成溶解曲线的时候，同样也有一条直线代表基准线的啊。如果突起没有超过那条线，就可以了！Bio-Rad的CFX分析系统肯定有这条线的！看你用的什么分析仪器的！

Originally posted by yanliusu at 2010-12-30 14:48:00:
溶解曲线只有单一峰值就是你的特异性条带，前面有个小峰值是非特异性的或者引物二聚体。有小峰的结果是不可靠的，因为SYBR染料能够与所有双链DNA结合，发出荧光，所以你可以增加模板浓度、减少引物量、提高退火温 ...