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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于HLPC流动相问题
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阿叉

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于HLPC流动相问题

我想先用热乙醇法萃取藻类叶绿素，然后再用高效液相色谱进行分析，可是液相色谱的条件怎么设定了？  
文献中都是用丙酮法萃取叶绿素，然后再用高效液相色谱分析，比如
色谱条件以Pinnacle Ò C18为色谱柱，V(甲醇)：V(丙酮)=80:20并加入质量分数为0.11%的冰乙酸为混合流动相，流速为1.10ml/min，检测波长为460nm，控制出峰时间10-30min，用高效液相色谱法进行叶绿素含量的测定。

我的意思就是能不能直接用热乙醇萃取，然后按文献中丙酮萃取后所采取的液相色谱条件，进行色谱分析了，这样到底可行吗？跪求高手，如果不能，能告诉我比较好的色谱条件？

[ Last edited by 1949stone on 2010-12-19 at 12:59 ]
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1楼 2010-12-18 16:28:12
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Adam_Li

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+3):鼓励积极参与~~~ 2010-12-18 17:07:43
看天(金币+3):鼓励回答 2010-12-18 17:07:48
阿叉(金币+1): 2010-12-19 12:29:36
阿叉(金币+1): 2010-12-19 13:07:23
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有机溶剂，如果没有对这个流动相做过测试的话可能回出现意外情况。
既然是做试验当然要做很多尝试，你说的方法如果别人没有做过，你当然要做过了才知道结果嘛。尝试之前你可以先过一针你的纯萃取液，然后再过叶绿素的溶液，这样可以对峰形做一个对比。而且先过热乙醇的话也可以初步判断你这个想法是否可行。
希望对你有所帮助。
我就是做hplc的，不过经验不是很多，而且我做的是表达蛋白的，和你做的流动相差别很大。
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2楼2010-12-18 17:03:43
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-19 11:08:02
引用回帖:
Originally posted by 阿叉 at 2010-12-18 16:28:12:
我想先用热乙醇法萃取藻类叶绿素，然后再用高效液相色谱进行分析，可是液相色谱的条件怎么设定了？  
文献中都是用丙酮法萃取叶绿素，然后再用高效液相色谱分析，比如
色谱条件以Pinnacle Ò C18为色 ...

可以的，样品怎么来的不影响后面的分析方法的，你可以按照自己的方法提取，然后按照别人的方法分析的。
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3楼2010-12-19 09:46:39
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Adam_Li at 2010-12-18 17:03:43:
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有 ...

你和楼上的讲的不一样啊
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4楼2010-12-19 12:43:52
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-12-19 09:46:39:


可以的，样品怎么来的不影响后面的分析方法的，你可以按照自己的方法提取，然后按照别人的方法分析的。

你和楼上的讲的不一样啊
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5楼2010-12-19 12:44:39
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 阿叉 at 2010-12-18 16:28:12:
我想先用热乙醇法萃取藻类叶绿素，然后再用高效液相色谱进行分析，可是液相色谱的条件怎么设定了？  
文献中都是用丙酮法萃取叶绿素，然后再用高效液相色谱分析，比如
色谱条件以Pinnacle Ò C18为色 ...

首先先谢谢，还有刚才回复错了，不好意思，
文献中用丙酮当萃取剂再用超声波萃取的，那么我想我可以用热乙醇萃取再用超声波萃取的，那么这样效果会不会好很多？还有就是这个超声波萃取仪器是不是就是那个超声波清洗机啊 ？
第二个问题，你说把乙醇有机溶剂蒸发掉，那么温度要控制多少才没有影响了？
第三个问题，按你说的先过一针纯萃取液，和叶绿素，看峰形对比，那么这个峰形对比是个什么样才能说明方法的可行性啊，先过一针热乙醇，峰形怎么样才能说明以丙酮为萃取剂所选取的流动相以及别的色谱条件，再以热乙醇取代丙酮后该色谱条件是可行的了，简单点说，就是过一针得到什么样的峰形能说明我选择的流动相是可行的，是比较好的了？

我是新手，不懂的地方很多，所以我尽量说的详细点，以免产生歧义啊，也希望你能多多指导小弟弟我，还希望不要先烦啊 先谢谢了，
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6楼2010-12-19 12:57:21
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阿叉

铜虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1):鼓励深入的讨论 2010-12-22 11:39:53
引用回帖:
Originally posted by Adam_Li at 2010-12-18 17:03:43:
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有 ...

首先先谢谢，还有刚才回复错了，不好意思，
文献中用丙酮当萃取剂再用超声波萃取的，那么我想我可以用热乙醇萃取再用超声波萃取的，那么这样效果会不会好很多？还有就是这个超声波萃取仪器是不是就是那个超声波清洗机啊 ？
第二个问题，你说把乙醇有机溶剂蒸发掉，那么温度要控制多少才没有影响了？
第三个问题，按你说的先过一针纯萃取液，和叶绿素，看峰形对比，那么这个峰形对比是个什么样才能说明方法的可行性啊，先过一针热乙醇，峰形怎么样才能说明以丙酮为萃取剂所选取的流动相以及别的色谱条件，再以热乙醇取代丙酮后该色谱条件是可行的了，简单点说，就是过一针得到什么样的峰形能说明我选择的流动相是可行的，是比较好的了？

我是新手，不懂的地方很多，所以我尽量说的详细点，以免产生歧义啊，也希望你能多多指导小弟弟我，还希望不要先烦啊 先谢谢了
本文来自: 小木虫论坛 http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2713873&fpage=1
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7楼2010-12-19 12:59:31
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-12-19 09:46:39:


可以的，样品怎么来的不影响后面的分析方法的，你可以按照自己的方法提取，然后按照别人的方法分析的。

你确定这样 ：按自己的方法提取 ，按别人的 方法分析？
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8楼2010-12-19 13:07:01
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Adam_Li at 2010-12-18 17:03:43:
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有 ...

其实我提出来的这个法子就是去两篇文献中的优点，但我怕优点不能兼容啊
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9楼2010-12-19 13:08:32
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yangjun130

铜虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2):good 2010-12-19 13:33:30
阿叉(金币+1): 2010-12-19 16:56:04
你萃取的时候可以使用乙醇进行萃取，我想请问下你有没有标准叶绿素的样品，如果有的话可以用乙醇溶解叶绿素后做几个标样，采用你看文献上说的流动相进行洗脱，看看图谱中有没有乙醇的峰出现。其实不管有没有乙醇的峰出现，都不会影响你后面的测定。
  然后你在将你乙醇萃取的样品稀释到适宜倍数，然后进样，对比标样图谱就可以了。

你这里只是因为你的萃取液和流动相恰好都还有丙酮而已，这个是巧合。他的意思并不是说你拿什么溶剂萃取就得加这个溶剂作为流动相，明白没有
引用回帖:
Originally posted by 阿叉 at 2010-12-18 16:28:12:
我想先用热乙醇法萃取藻类叶绿素，然后再用高效液相色谱进行分析，可是液相色谱的条件怎么设定了？  
文献中都是用丙酮法萃取叶绿素，然后再用高效液相色谱分析，比如
色谱条件以Pinnacle Ò C18为色 ...

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10楼2010-12-19 13:11:44
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yangjun130 at 2010-12-19 13:11:44:
你萃取的时候可以使用乙醇进行萃取，我想请问下你有没有标准叶绿素的样品，如果有的话可以用乙醇溶解叶绿素后做几个标样，采用你看文献上说的流动相进行洗脱，看看图谱中有没有乙醇的峰出现。其实不管有没有乙醇的 ...

懂了，非常感谢，你说的我基本了解了，太感谢了，
目前还没有标准叶绿素样品，不过应该可以买的，还有个问题就是我要不要按1楼说的，把乙醇给蒸发了再进行色谱分析了，再次感谢
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12楼2010-12-19 16:57:33
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yangjun130

铜虫 (小有名气)
阿叉(金币+1): 2010-12-20 11:11:45
引用回帖:
Originally posted by 阿叉 at 2010-12-19 16:57:33:

懂了，非常感谢，你说的我基本了解了，太感谢了，
目前还没有标准叶绿素样品，不过应该可以买的，还有个问题就是我要不要按1楼说的，把乙醇给蒸发了再进行色谱分析了，再次感谢

你进样只有20ul吧，那么点乙醇会影响么，我感觉应该是不会的。
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13楼2010-12-19 18:12:34
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yangjun130 at 2010-12-19 18:12:34:




你进样只有20ul吧，那么点乙醇会影响么，我感觉应该是不会的。

一般进样都是20ul的啊，你这么讲很有道理啊  谢谢啊
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14楼2010-12-20 11:12:37
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Adam_Li at 2010-12-18 17:03:43:
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有 ...

文献中用丙酮当萃取剂再用超声波萃取的，那么我想我可以用热乙醇萃取再用超声波萃取的，那么这样效果会不会好很多？还有就是这个超声波萃取仪器是不是就是那个超声波清洗机啊 ？
第二个问题，你说把乙醇有机溶剂蒸发掉，那么温度要控制多少才没有影响了？乙醇的蒸发量是多少不会有影响？还有乙醇蒸发掉了，那叶绿素不是不溶了，不是产生影响？
第三个问题，按你说的先过一针纯萃取液，和叶绿素，看峰形对比，那么这个峰形对比是个什么样才能说明方法的可行性啊，先过一针热乙醇，峰形怎么样才能说明以丙酮为萃取剂所选取的流动相以及别的色谱条件，再以热乙醇取代丙酮后该色谱条件是可行的了，简单点说，就是过一针得到什么样的峰形能说明我选择的流动相是可行的，是比较好的了？

我是新手，不懂的地方很多，所以我尽量说的详细点，以免产生歧义啊，也希望你能多多指导小弟弟我，还希望不要先烦啊 先谢谢了
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15楼2010-12-22 11:34:06
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Adam_Li at 2010-12-18 17:03:43:
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有 ...

蒸发乙醇不是有影响，那个度在哪了
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16楼2010-12-22 11:34:54
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yangjun130 at 2010-12-19 13:11:44:
你萃取的时候可以使用乙醇进行萃取，我想请问下你有没有标准叶绿素的样品，如果有的话可以用乙醇溶解叶绿素后做几个标样，采用你看文献上说的流动相进行洗脱，看看图谱中有没有乙醇的峰出现。其实不管有没有乙醇的 ...

您所提到的将我乙醇萃取的样品稀释，用什么溶剂稀释，用水还是乙醇？
如果用水，叶绿素不溶于水，那么他们三个组分会分层，还是都混溶一起了？
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18楼2010-12-22 12:20:16
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小兵pp

银虫 (小有名气)
你如果用紫外检测器检测的话，乙醇是不会出现峰的。
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19楼2010-12-22 15:40:00
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)
其实，你的叶绿素标样用乙醇处理的，你的样品也是乙醇处理的，这不就得了吗？
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20楼2010-12-22 17:06:49
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 最爱花诗雨 at 2010-12-22 17:06:49:
其实，你的叶绿素标样用乙醇处理的，你的样品也是乙醇处理的，这不就得了吗？

叶绿素标样用乙醇处理的，你的样品也是乙醇处理，我是打算这么做，可是流动相怎么确定了
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21楼2010-12-23 11:29:31
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 小兵pp at 2010-12-22 15:40:00:
你如果用紫外检测器检测的话，乙醇是不会出现峰的。

用紫外检测器只是测定我过色谱时确定的波长，
那跟我过液相色谱乙醇不出现峰有什么联系吗
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22楼2010-12-23 11:31:33
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小兵pp

银虫 (小有名气)
阿叉(金币+1): 2010-12-23 22:33:49
乙醇没有共轭双键，不会有紫外吸收的。紫外检测器检测不到，当然不会有峰啊
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23楼2010-12-23 11:53:18
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小兵pp

银虫 (小有名气)
我的意思是，你不用考虑乙醇的存在会有影响。乙醇有时候可以做流动相的，不过很少选择
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24楼2010-12-23 11:54:55
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 小兵pp at 2010-12-23 11:54:55:
我的意思是，你不用考虑乙醇的存在会有影响。乙醇有时候可以做流动相的，不过很少选择

懂了 高手啊
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25楼2010-12-23 22:33:34
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 阿叉 at 2010-12-23 11:29:31:

叶绿素标样用乙醇处理的，你的样品也是乙醇处理，我是打算这么做，可是流动相怎么确定了

流动相应该是跟柱子有关系吧
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26楼2010-12-24 09:17:55
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yuyan87513811楼
2010-12-19 13:23   回复  
morise17楼
2010-12-22 11:36   回复  
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2010-12-19 09:46:39: 可以的，样品怎么来的不影响后面的分析方法的，你可以按照自己的方法提取，然后按照别人的方法分析的。

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