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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于HLPC流动相问题
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阿叉

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于HLPC流动相问题

我想先用热乙醇法萃取藻类叶绿素，然后再用高效液相色谱进行分析，可是液相色谱的条件怎么设定了？  
文献中都是用丙酮法萃取叶绿素，然后再用高效液相色谱分析，比如
色谱条件以Pinnacle Ò C18为色谱柱，V(甲醇)：V(丙酮)=80:20并加入质量分数为0.11%的冰乙酸为混合流动相，流速为1.10ml/min，检测波长为460nm，控制出峰时间10-30min，用高效液相色谱法进行叶绿素含量的测定。

我的意思就是能不能直接用热乙醇萃取，然后按文献中丙酮萃取后所采取的液相色谱条件，进行色谱分析了，这样到底可行吗？跪求高手，如果不能，能告诉我比较好的色谱条件？

[ Last edited by 1949stone on 2010-12-19 at 12:59 ]
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1楼 2010-12-18 16:28:12
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yangjun130

铜虫 (小有名气)
阿叉(金币+1): 2010-12-20 11:11:45
引用回帖:
Originally posted by 阿叉 at 2010-12-19 16:57:33:

懂了，非常感谢，你说的我基本了解了，太感谢了，
目前还没有标准叶绿素样品，不过应该可以买的，还有个问题就是我要不要按1楼说的，把乙醇给蒸发了再进行色谱分析了，再次感谢

你进样只有20ul吧，那么点乙醇会影响么，我感觉应该是不会的。
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13楼2010-12-19 18:12:34
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Adam_Li

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+3):鼓励积极参与~~~ 2010-12-18 17:07:43
看天(金币+3):鼓励回答 2010-12-18 17:07:48
阿叉(金币+1): 2010-12-19 12:29:36
阿叉(金币+1): 2010-12-19 13:07:23
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有机溶剂，如果没有对这个流动相做过测试的话可能回出现意外情况。
既然是做试验当然要做很多尝试，你说的方法如果别人没有做过，你当然要做过了才知道结果嘛。尝试之前你可以先过一针你的纯萃取液，然后再过叶绿素的溶液，这样可以对峰形做一个对比。而且先过热乙醇的话也可以初步判断你这个想法是否可行。
希望对你有所帮助。
我就是做hplc的，不过经验不是很多，而且我做的是表达蛋白的，和你做的流动相差别很大。
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2楼2010-12-18 17:03:43
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1):鼓励积极参与~~~ 2010-12-19 11:08:02
引用回帖:
Originally posted by 阿叉 at 2010-12-18 16:28:12:
我想先用热乙醇法萃取藻类叶绿素，然后再用高效液相色谱进行分析，可是液相色谱的条件怎么设定了？  
文献中都是用丙酮法萃取叶绿素，然后再用高效液相色谱分析，比如
色谱条件以Pinnacle Ò C18为色 ...

可以的，样品怎么来的不影响后面的分析方法的，你可以按照自己的方法提取，然后按照别人的方法分析的。
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3楼2010-12-19 09:46:39
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阿叉

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Adam_Li at 2010-12-18 17:03:43:
藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。
如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有 ...

你和楼上的讲的不一样啊
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4楼2010-12-19 12:43:52
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