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[交流]
【求助/交流】关于HLPC流动相问题
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我想先用热乙醇法萃取藻类叶绿素，然后再用高效液相色谱进行分析，可是液相色谱的条件怎么设定了？ 文献中都是用丙酮法萃取叶绿素，然后再用高效液相色谱分析，比如 色谱条件以Pinnacle Ò C18为色谱柱，V(甲醇)：V(丙酮)=80:20并加入质量分数为0.11%的冰乙酸为混合流动相，流速为1.10ml/min，检测波长为460nm，控制出峰时间10-30min，用高效液相色谱法进行叶绿素含量的测定。 我的意思就是能不能直接用热乙醇萃取，然后按文献中丙酮萃取后所采取的液相色谱条件，进行色谱分析了，这样到底可行吗？跪求高手，如果不能，能告诉我比较好的色谱条件？ [ Last edited by 1949stone on 2010-12-19 at 12:59 ] |
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dhd997(金币+2):good 2010-12-19 13:33:30
阿叉(金币+1): 2010-12-19 16:56:04
dhd997(金币+2):good 2010-12-19 13:33:30
阿叉(金币+1): 2010-12-19 16:56:04
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你萃取的时候可以使用乙醇进行萃取，我想请问下你有没有标准叶绿素的样品，如果有的话可以用乙醇溶解叶绿素后做几个标样，采用你看文献上说的流动相进行洗脱，看看图谱中有没有乙醇的峰出现。其实不管有没有乙醇的峰出现，都不会影响你后面的测定。 然后你在将你乙醇萃取的样品稀释到适宜倍数，然后进样，对比标样图谱就可以了。 你这里只是因为你的萃取液和流动相恰好都还有丙酮而已，这个是巧合。他的意思并不是说你拿什么溶剂萃取就得加这个溶剂作为流动相，明白没有 |
10楼2010-12-19 13:11:44
★ ★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+3):鼓励积极参与~~~ 2010-12-18 17:07:43
看天(金币+3):鼓励回答 2010-12-18 17:07:48
阿叉(金币+1): 2010-12-19 12:29:36
阿叉(金币+1): 2010-12-19 13:07:23
rainwander(金币+3):鼓励积极参与~~~ 2010-12-18 17:07:43
看天(金币+3):鼓励回答 2010-12-18 17:07:48
阿叉(金币+1): 2010-12-19 12:29:36
阿叉(金币+1): 2010-12-19 13:07:23
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藻类提取的话其实你也可以采取超声破碎的方法，破碎液过滤后可以直接用你说的流动相过HPLC。 如果你你一定要用热乙醇的放法提取的话，建议你在过HPLC之前最好先将乙醇悬蒸掉，一是可以浓缩体积，二是因为乙醇是有机溶剂，如果没有对这个流动相做过测试的话可能回出现意外情况。 既然是做试验当然要做很多尝试，你说的方法如果别人没有做过，你当然要做过了才知道结果嘛。尝试之前你可以先过一针你的纯萃取液，然后再过叶绿素的溶液，这样可以对峰形做一个对比。而且先过热乙醇的话也可以初步判断你这个想法是否可行。 希望对你有所帮助。 我就是做hplc的，不过经验不是很多，而且我做的是表达蛋白的，和你做的流动相差别很大。 |
2楼2010-12-18 17:03:43
3楼2010-12-19 09:46:39
4楼2010-12-19 12:43:52
